传统ES打靶基因敲除与TurboKnockout®基因敲除对比

日期: 2016年11月09日


    

传统ES打靶基因敲除与TurboKnockout®基因敲除对比

 

上个世纪 80 年代,随着基因重组技术的不断完善和小鼠胚胎干细胞(ES)体外培养技术的成熟,基于同源重组的 ES 打靶得以建立。ES 打靶基因敲除技术修饰准确、效果稳定、成功率极高,一直被认为是对模式动物进行特定基因修饰的金标准。但由于嵌合体阳性率低,且必须与工具鼠交配才能获得删除 Neo 的杂合子,使得构建周期长达 12-16 个月。

 

20 世纪初,核酸酶基因编辑技术(TALEN、CRISPR/Cas9)出现,其周期短(6~8 个月)、无物种限制等优势迅速受到广大科研学者的青睐。但由于脱靶效应至今无法避免,也无法胜任复杂的基因敲除,因此传统 ES 打靶技术仍是首选。

 

那么,如何在保持传统 ES 打靶优势的基础上优化其构建流程呢?赛业 TurboKnockout®基因敲除技术应运而生。TurboKnockout®基因敲除通过跨越 ES 打靶「嵌合体阳性率低」阶段并真正实现自删除 Neo,从而减少两代繁育时间,使 ES 打靶缩短至 6~8 个月。在核酸酶技术尚未成熟之前,TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。

 

技术对比:

 

传统ES打靶技术对比

 

技术原理:

 

1、跨越「嵌合体」阶段:

基于 ES 打靶的 TurboKnockout®采用了独特建系的具有高效遗传优势的 ES 细胞系(实验数据表明,在获得 100% 雄性嵌合体小鼠方面,TurboKnockout® ES 细胞系是对照传统 ES 细胞系的三倍以上),通过特定胚胎发育阶段的显微注射,使 TurboKnockout® ES 细胞 100% 代替内源 ES 细胞,从而实现跨越「嵌合体」阶段。

 

2、实现自删除 Neo:

 

TurboKnockout®采用独特的 Self-deleting Neo Cassette 所获得的嵌合体,在与任何品系的小鼠交配均可百分百自删除 Neo。也就是说,TurboKnockout®不仅仅实现跨越「嵌合体」阶段,还能真正自删除 Neo 从而快速获得去 Neo 的杂合子小鼠。

 

技术优势:

● 基因修饰准确、效果稳定;

● 没有脱靶效应,可胜任复杂的基因敲除;

● 自删除 Neo 可进一步缩短服务周期,简化了小鼠交配流程。

 

服务流程对比:

TurboKnockout®基因敲除

 

因此,与传统 ES 打靶相比,赛业生物革命性的 TurboKnockout®基因敲除能直接减少两代繁育时间,缩短 ES 打靶至 6~8 个月。在核酸酶技术(TALEN/CRISPR)尚未成熟之前,TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。

 

模式动物完整解决方案:

TurboKnockout基因敲除小鼠:减少两代繁育时间,ES打靶仅需6个月

CRISPR-Pro基因敲除:基因敲除长达20kb,基因敲入长达10kb

人源化小鼠:平台体系成熟,服务于辉瑞、阿斯利康、恒瑞医药等知名药企

转基因小鼠:Nature等顶级期刊引用,年构建高达5000例

 

赛业生物微信

  • 侧边栏广告 - 模式动物成功案例
  • 侧边栏广告 - 科研奖励基金计划
  • 侧边栏广告-积分兑换礼品