shRNA干扰慢病毒载体介绍

日期: 2017年06月23日


    

shRNA干扰慢病毒载体

 

shRNA干扰慢病毒载体由慢病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和和一个高拷贝复制子pUCori。慢病毒基因组序列是从元件5'LTR开始,到元件3'LTR结束。


慢病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子:一个是shRNA表达盒子,另外一个是marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上,无需重新构建。我们提供了荧光marker、抗药性marker或者荧光/抗药性双markerft您选择。shRNA表达盒子则包括三部分序列:U6启动子、shRNA和终止子。U6启动子已经克隆在载体上,每次构建载体,只需通过annealing-ligation技术将感兴趣的shRNA和终止子克隆到载体上即可。


l、克隆方法


赛业生物采用引物退火连接的克隆方法,将shRNA克隆到慢病毒骨架上,如下图:

 

shRNA克隆到慢病毒骨架

 

我们的shRNA干扰慢病毒载体使用了human U6 promoter转录shRNA,shRNA在体内被剪切成21 nt的单链siRNA,并与mRNA互补引起mRNA的降解。21 nt昀单链siRNA序列与目标mRNA序列的匹配程度决定了shRNA的干扰效率,而单链siRNA序列与其他mRNA序列的匹配程度决定了shRNA的脱靶效应。我们建立了人、小鼠和大鼠的shRNA打靶序列信息库,您可以登陆www.vectorbuilder.com选择感兴趣的人、小鼠和大鼠的shRNA进行载体设计。


2、质量控制


我们会对每一个shRNA干扰慢病毒载体进行挑克隆,并测序shRNA片段。正确后,再进行酶切鉴定,酶切鉴定合格后交付。

 

赛业生物提供分子生物学技术服务:

基因调取:中国最大的基因库,小鼠基因2万个,人类基因3万个

载体构建VectorBuilder高通量载体构建平台,2分钟完成在线载体设计

病毒包装慢病毒包装腺病毒包装腺相关病毒包装

 

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