基因表达腺病毒载体介绍

日期: 2017年06月29日


    

基因表达腺病毒载体

 

基因表达腺病毒载体由腺病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。腺病毒基因组序列是从元件5'ITR开始,到元件3'ITR结束。


腺病毒基因组序列可容纳一个外源基因表达盒子,即目的基因表达盒子。目的基因表达盒子包括三部分序列:CMV启动子、目的基因和polyA。CMV启动子和polyA已经克隆在载体上,每次构建载体,只需通过site-specific recomination cloning技术将感兴趣的目的基因序列克隆到载体上即可。

 

1、克隆方法

 

赛业采用位点特异性重组的克隆方法,将目的基因克隆到腺病毒骨架上,如下图:

 

基因表达腺病毒载体克隆方法

 

一般来说,将目的基因放在pDown入门克隆上。每次构建,我们只需构建一个携带目的基因的pDown,再与携带了CMV启动子的腺病毒骨架载体进行位点特异重组反应就可获得基因表达腺病毒载体


能否构建一个不是CMV启动子驱动的基因表达腺病毒载体?


能。我们有另外一个腺病毒骨架载体,是专用于构建非CMV启动子驱动目的基因的腺病毒表达载体,但构建工艺相对较为复杂。


2、质量控制


我们会对每一个pDown进行目的基因片段测序,序列正确后再进行重组。然后对基因表达腺病毒载体挑克隆,并进行酶切鉴定,酶切鉴定合格后交付。

 

赛业生物提供分子生物学技术服务:

基因调取:中国最大的基因库,小鼠基因2万个,人类基因3万个

载体构建VectorBuilder高通量载体构建平台,2分钟完成在线载体设计

病毒包装慢病毒包装腺病毒包装腺相关病毒包装

 

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