病毒包装

病毒包装

  Cyagen目前提供腺病毒、慢病毒与逆转录病毒表达系统,包括载体构建与病毒包装。您可以根据实验需要,选择合适的载体系统。

慢病毒系统
        慢病毒(Lentivirus )载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,因此它可以有效地感染包括神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等在内的几乎所有的哺乳动物细胞,并且感染效率非常高,是传统方法的数倍甚至数十倍。慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达,是目前最受欢迎的基因功能研究工具。慢病毒的研究发展很快,也很深入,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,预示着慢病毒有着广阔的应用前景。

Cyagen 慢病毒系统组成
1、一个表达载体,含有目的基因、目的基因的启动子以及其它病毒包装所需的必要元件;
2、一套包含三个辅助质粒的包装质粒Mix,分别表达产生病毒所需的结构蛋白和逆转录酶;
3、293FT 细胞株,能够在表达载体和包装质粒mix 共转染后包装出慢病毒。

系统优势
1、生产出以HIV-1 为基础的慢病毒,它能有效地转导分裂和非分裂的哺乳动物细胞,因此它的应用潜能超过传统的以MLV 为基础的逆转录系统。
2、无论靶细胞是在体内还是体外培养,慢病毒都能有效地将外源基因携带进去。相比传统腺病毒的瞬时转染,慢病毒能够将目的基因整合到宿主基因组,从而能够长期稳定地表达。
3、宿主非常广泛,包括人、猩猩、小鼠、大鼠、兔、狗等所有已经研究过的哺乳动物。
4、表达载体和包装质粒形成反式互补,且包装质粒又分别由三个质粒构成,从而为安全性提供了更加可靠的保障。

Cyagen 可选的载体元件列表
        Cyagen 的载体元件库可以为您提供包罗万象的载体元件,包括大家熟悉的广泛表达启动子,也包括丰富的组织特异性表达启动子、各种颜色荧光标记基因、化学发光标记、色度法筛选基因、正负筛选基因、可诱导的rtTA 基因、双顺反子,标签蛋白等,均可根据您的要求进行选择。

慢病毒转染案例

                     

          293T细胞                       293T细胞

 

 

腺病毒系统
        采用Cyagen Adenoviral Expression System 生产出的腺病毒,它既能把外源基因携带进分裂细胞表达,又能把外源基因携带进非分裂细胞表达。

系统组成:
1、一个表达载体,含有目的基因、目的基因的启动子以及一些把这个载体包装进病毒的元件;
2、293A 细胞株,能够在表达载体转染后包装出腺病毒;

 

系统优势:
1、宿主范围广 -腺病毒可感染种类广泛的有丝分裂后期细胞;
2、包装容量大 -包装容量可以达到6 kb;
3、病毒滴度高 -病毒活性滴度达到1011 PFU/mL。

腺病毒转染案例

                     

               腺病毒包装-出毒              感染293A细胞 

 

 

逆转录病毒载体系统

系统组成:
1、一个含有目的基因的表达载体;
2、一个编码VSV-G 的辅助质粒;
3、表达gag/pol 的辅助质粒;
4、293T 包装细胞。

系统优势:
1、转导效率高,能够有效提高基因的转染率;
2、相对于腺病毒来说,能够稳定整合到细胞的基因组中,能够稳定遗传。

 

shRNA 慢病毒技术服务

        Cyagen 的 shRNA 慢病毒载体是由U6 启动子驱动shRNA 实现,并连接了eGFP,可以实时监测载体的转染效率,同时还包含Amp 抗性基因,可以无限制扩增。



shRNA 慢病毒系统作用示意图

设计shRNA 靶序列
         一般情况下,Cyagen 将根据客户的目的 mRNA 靶基因,分别设计 3 条不同的shRNA 序列,shRNA 序列一般为 19 - 21bp 长。也可以按照客户的要求来设计,由客户确定shRNA 序列的长度。 对于每条选定的靶序列,设计正义链和反义链,以 loop(9nt ) 相连,合成shRNA(short hairpin RNA)。

shRNA 慢病毒载体构建
         Cyagen 可为客户合成shRNA、双酶切shRNA 空载体、连接与转化、测序鉴定、载体制备及定量。

shRNA 慢病毒包装
         Cyagen 可将构建好的shRNA 慢病毒载体包装成具有高转染效率的慢病毒,并提供病毒滴度检测服务。

实验结果
         携带shRNA 的慢病毒载体、慢病毒及测序结果等。

优点
     1、长时间抑制靶基因的表达,可持续数周;
     2、相对其他RNAi 方法,成功率高,而且knockdown 更彻底;
     3、在Tet-on 系统中可诱导抑制靶基因的表达;
     4、用shRNA 慢病毒载体,大大提高了转导率。

 

三套病毒系统比较