HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠_构建_优势

赛业生物基于国内创新性全人抗体药物研发的需求，凭借扎实的技术创新实力，以及自主研发的TurboKnockout^®技术，采取大片段原位替换策略，替换小鼠体内的VH、VK和VL基因为人源基因，构建了HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠。该小鼠能够在体内产生具有高亲和力和低免疫原性的全人源化抗体，极大加快抗体发现和新药研发过程，这一点已经得到了多家跨国药企、生物制药公司、科研学术机构的验证。

HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠模型构建策略示意图

图1. HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠模型构建策略示意图

采取大片段原位替换策略建立HUGO-Mab™小鼠，采取大片段原位替换策略，替换抗体重链、Kappa和Lambda轻链可变区基因为人源基因，同时保留小鼠恒定区编码基因和调控元件。
小鼠重链V(D)J结构域被完全敲除，在原位被人重链V(D)J基因取代。
敲除小鼠Kappa轻链，原位替换为人Kappa轻链基因，保留小鼠恒定区以支持正常的B细胞发育。
敲除小鼠的Lambda轻链，原位替换为人的Lambda 轻链。

HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠模型优势

开发更高人源化抗体：V(D)J全人源化抗体重链序列；免疫球蛋白可变区全人源化。
具有更丰富的抗体序列多样性：全人源化的可变区V(D)J重排产生丰富的抗体序列；应对抗原刺激，与野生小鼠一样的免疫应答。
筛选高亲和力抗体药物分子：能产生nM级高亲和力抗体分子；具有与对标抗体相当的binding及blocking亲和力。
采用更灵活的商业模式：授权使用或共同开发。

HUGO-Mab™全人单克隆抗体小鼠模型验证数据

HUGO-Mab™小鼠能够在体内产生具有高亲和力和低免疫原性的全人源化抗体，在功能活性方面优于FDA批准的标准疗法。

免疫系统对比

图2. V(D)J HUGO-Mab™小鼠重排频率。A-C：重链V(D)J基因的频率分布与人类相似；D-E：kappa轻链基因的使用频率分布与人类相似；F：Lambda轻链基因的使用频率分布与人类相似。

免疫系统完整性和B细胞发育水平检测

图3. HUGO-Mab™全人单克隆抗体鼠免疫系统和B细胞发育水平。A：HUGO-Mab™小鼠脾脏中T、B、NK、巨噬细胞发育正常；B：HUGO-Mab™小鼠脾脏内过渡性T1和T2细胞发育正常，成熟T细胞发育略有延迟；C：HUGO-Mab™小鼠脾脏边缘B细胞发育正常，脾脏滤泡B细胞发育略有延迟。

免疫反应

图4. HUGO-Mab™小鼠免疫反应。用人重组蛋白抗原进行免疫后，HUGO-Mab™小鼠显示出与野生型C57BL/6N小鼠相似的抗原特异性血清滴度。以上是四种不同治疗靶抗原A、B、C和D的免疫血清数据。

PD-L1靶点筛选及功能验证

图5. HUGO-Mab™小鼠Anti-PD-L1分子产生。A：Anti-PD-L1和PD-L1 His蛋白结合活性检测；B：Anti-PD-L1和过表达PD-L1的CHO细胞的结合活性；C：Anti-PD-L1报告细胞阻断实验。

Anti-PD-L1抗体的动态亲和力检测

Ab	KD(M)	Kon(M^-1S^-1)	Koff(S^-1)
6-B11-A2	4.230x10^-10	1.085x10⁶	4.592x10^-4
131-2-C3	4.319x10^-11	1.990x10⁶	8.594x10^-5
131-4-G9	7.757x10^-11	1.240x10⁶	9.622x10^-5
Atezolizumab	9.605x10^-11	1.777x10⁶	1.707x10^-4

图6. Anti-PD-L1抗体亲和力比较。对比Atezolizumab对标抗体，HUGO-Mab™小鼠产生的抗体获得更高的亲和力。

Anti-PD-L1抗体的T细胞的功能活性

图7. HUGO-Mab™小鼠产生的Anti-PD-L1抗体对T细胞的激活作用。将PBMC和成熟DC细胞与不同浓度的Anti-PD-L1抗体混合3-5天，取上清液检测il-2和IFN-γ细胞因子的浓度。

体内功能验证

图8. HUGO-Mab™小鼠产生的抗体对肿瘤生长的抑制作用。HUGO-Mab™小鼠产生的抗体（131-4-G9）比对应的抗体药物（Tecentriq）具有更强的肿瘤生长抑制活性。