Foxp3-IRES-mRFP(FIR)小鼠

这种Foxp3报告小鼠模型可让您有效地追踪和区分来自不同淋巴细胞谱系和淋巴器官表达Foxp3的细胞,是一种强大的药物测试工具:

■ 研究自身免疫性疾病中免疫耐受机制的调节。

■ 通过发现免疫检查点抑制剂治疗癌症。

这种报告小鼠模型得到了广泛的使用和验证,已在50多个知名期刊报道过。

 

品系背景:C57BL/6J

 

品系说明:

■ mRFP报告基因忠实地反映了Foxp3的表达。

■ 内源性Foxp3的表达不受插入基因的影响。

 

模型验证:

Foxp3是调节性T细胞特异性转录因子,可作为调节性T细胞发育和功能的主要调节因子。

该Foxp3-IRES-mRFP(FIR)小鼠模型可直接用于体内检测表达Foxp3的细胞。与其他现有的通过随机插入生成的Foxp3小鼠相反,该敲入小鼠保留Foxp3的生理表达并能够监控内源性的Foxp3。

内源性Foxp3的表达无异常:

■ 内源性Foxp3表达并发挥作用:将报告基因插入内源性Foxp3基因座的3'UTR中。

■ 报告基因忠实地反映了Foxp3的表达。

能很好地追踪Treg 细胞:

■ 通过监测mRFP的表达可以直接检测表达Foxp3的细胞(图1)。

■ 免疫系统不受影响:Treg细胞功能完好(图2)。

■ 能很好地监测Treg细胞的迁移和细胞分选。

 

 

图1. mRFP的表达与体内表达Foxp3的T细胞相关。

左图:用荧光团偶联的抗CD4和抗CD25抗体对Foxp3-IRES-mRFP小鼠的外周淋巴细胞染色,检测到了Foxp3的表达。通过流式细胞术监测CD4 T细胞中mRFP的表达。

右图:通过FACS从纯化的FIR小鼠不同的外周CD4 T细胞群中提取RNA。通过TaqMan实时定量PCR测定Foxp3的相对mRNA水平,并绘制两个实验的合并结果。

 

 

图2. mRFP的表达不会影响体内表达Foxp3的T细胞的调节活性。通过FACS纯化对CD4+mRFP+抑制(S)和CD4+CD25-mRFP-应答(R)的T细胞。抑制细胞和应答细胞可以单独培养,也可以指定比例(R:S)混合,而应答细胞的数量保持不变。在辐射的APC存在下,T细胞被可溶性抗CD3和抗CD28抗体激活。刺激后三天,通过3 H胸苷掺入测定法测量T细胞增殖。

 

引用文献精选:

1. Wan YY; Flavell RA. 2005. Identifying Foxp3-expressing suppressor T cells with a bicistronic reporter.Proc Natl Acad Sci USA 102(14):5126-31.

2. Gutcher I; Donkor MK; Ma Q; Rudensky AY; Flavell RA; Li MO. 2011. Autocrine Transforming Growth Factor-beta1 Promotes In Vivo Th17 Cell Differentiation. Immunity 34(3):396-408.

3. Chae WJ; Gibson TF; Zelterman D; Hao L; Henegariu O; Bothwell AL. 2010. Ablation of IL-17A abrogates progression of spontaneous intestinal tumorigenesis. Proc Natl Acad Sci USA 107(12):5540-4.

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