hGITR/Foxp3小鼠

通过hGITR与Foxp3-IRES-mRFP(FIR)小鼠交配建立的GITR/Foxp3小鼠模型。FIR的双谱报告基因(bicistronic reporter)表达了一种红色荧光蛋白(RFP),敲入内源性Foxp3位点,能反映Foxp3的表达。

 

品系背景:C57BL/6J×C57BL/6N

 

品系说明:

■ GITR的胞外域完全人源化。

■ 人GITR在小鼠体内表达具有正常的生理表达和调节模式。

■ 小鼠的免疫系统功能健全。

■ 缺乏小鼠GITR的表达,从而避免交叉反应。

■ mRFP报告基因忠实地反映了Foxp3的表达。

■ 内源性Foxp3的表达不受插入基因的影响。

 

模型验证:

图1. hGITR/Foxp3小鼠的hGITR表达模式与mGITR在野生型小鼠中的表达模式一致。被αCD3/αCD28刺激的野生型和hGITR/Foxp3小鼠脾脏细胞中的Treg细胞和经典CD4+T细胞上分别表达鼠源GITR和人源GITR。

 

 

图2. RFP表达能够反映Foxp3的表达。mRFP在hGITR/Foxp3小鼠非通透性(A)或通透性(B)新鲜分离脾细胞(CD3+CD4+)上的表达。对mRFP+细胞进行分选和渗透,以检测Foxp3 (C)。

 

 

图3. 保留了Treg细胞对免疫功能的抑制性调控作用。分离效应T细胞(CD4+CD25-)并用CTV进行标记,在抗原呈递细胞培养的环境中,将效应T细胞与不同浓度的RFP+Treg细胞用丝裂霉素和αCD3处理四天时间。采用流式细胞术(CTV+细胞)检测Treg细胞的增殖情况。

 

图4. 在人源化GITR小鼠体内,hGITR单抗的处理能够发挥抗肿瘤的作用。hGITR纯合子小鼠种植MB49膀胱癌细胞,在αhGITR抗体的处理下肿瘤生长受到抑制。

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