品系背景：C57BL/6N

品系构建策略：

PD-1蛋白由胞外区、跨膜区和胞内区组成。其中，胞外区含一个免疫球蛋白可变区结构域。将小鼠PD-1胞外区替换为人源PD-1胞外结构域、保留小鼠跨膜结构域和胞内结构域构建嵌合型人源化PD-1小鼠模型。

品系说明：

■ hPD-1在小鼠体内具有正常的生理表达和调节模式。

■ 保留小鼠PD-1蛋白的结构域，保证正常的胞内信号转导。

■ 小鼠的免疫系统功能健全。

■ 缺乏小鼠靶基因的表达，从而避免交叉反应。

研究应用：

该模型可用于评估PD-1靶向化合物在免疫健全小鼠体内的药效及安全性：

■ 与人源肿瘤细胞系 MC38-hPD-L1联用：

构建同源肿瘤模型，以测试靶向人PD-1和人PD-L1的联合疗法的疗效。

■ 与hVISTA小鼠（hPD-1/hVISTA）杂交：

这种双人源化的hPD-1/hVISTA模型能够在免疫健全的小鼠中评估靶向人PD-1和/或人VISTA的两种化合物。

模型验证：

图1.  hPD-1在hPD-1小鼠中的表达模式与mPD-1在野生型小鼠中的表达模式一致。

hPD-1和mPD-1分别在αCD3/αCD28活化的人源化PD1小鼠和野生型小鼠的脾细胞（A）Treg亚群、CD4⁺亚群（CD3⁺CD4⁺Foxp3^-）（B） CD8⁺T（CD3⁺CD8⁺）亚群上表达。

图2.  hPD-1在PD-1人源化小鼠的肿瘤浸润细胞中的表达。  

从接种了MC38细胞30天的野生型小鼠和hPD-1小鼠中分离肿瘤浸润细胞。hPD-1小鼠CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞上表达hPD-1蛋白，野生型小鼠的CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞上表达mPD-1蛋白。

图3. T细胞活化（IL-2的产生和扩增）在野生型小鼠和PD-1人源化小鼠之间没有差别。

A. 采用ELISA法测定野生型小鼠和PD-1人源化小鼠αCD3/αCD28活化脾细胞的上清液中IL-2的产生情况，两者没有差别。

B. αCD3激活的脾细胞和淋巴结（LN）中的 CD4⁺T细胞亚群（CD4⁺CD25^-），CFSE标记显示在两种小鼠之间的活化CD4⁺T细胞亚群的数量没有明显差别。

图4. 人源化PD-1小鼠体内观察到hPD-1单抗的抗肿瘤活性。

A. 接种MC3肿瘤细胞28天后，分别用A、B、C三种αhPD-1单抗以及同型对照治疗的hPD-1小鼠体内肿瘤体积。

B. 分别对野生型和人源化PD-1小鼠颅内植入GL261鼠胶质瘤细胞后，再用αhPD-1或αmPD-1处理，αhPD-1的治疗能够提高人源化PD-1小鼠的生存时长。