品系背景：C57BL/6N

品系构建策略：

在小鼠PD-1基因位点敲入人源PD-1胞外域序列，保留小鼠跨膜域和胞内域，构建嵌合型PD-1人源化小鼠模型。

品系说明：

• hPD-1在小鼠体内具有正常的生理表达和调节模式。

• PD-1胞外域人源化，利于hPD-1靶向药物的识别。

• 保留小鼠PD-1胞内域，保证正常的胞内信号转导。

• 小鼠靶基因不表达，避免交叉反应。

• 小鼠的免疫系统功能健全。

研究应用：

本模型可用于评估hPD-1靶向药物在免疫健全小鼠体内的有效性及安全性：

• 与人源化肿瘤细胞系联用

例如：与MC38-hPD-L1肿瘤细胞系联用，构建同源肿瘤模型，以测试靶向hPD-1和hPD-L1的联合疗法的疗效。

• 与其他免疫检查点人源化小鼠杂交

例如：与hVISTA小鼠杂交，在得到的双人源化的hPD-1/hVISTA小鼠模型中评估靶向hPD-1和/或hVISTA的两种药物。

模型验证：

• PD-1表达检测

图1.  hPD-1在hPD-1小鼠中的表达模式与mPD-1在野生型小鼠中的表达模式一致。

hPD-1和mPD-1在经αCD3/αCD28抗体活化的hPD-1小鼠和野生型小鼠脾细胞中的表达情况：（A）Treg亚群、CD4⁺亚群（CD3⁺CD4⁺Foxp3^-）和（B）CD8⁺ T（CD3⁺CD8⁺）亚群。

图2. hPD-1在hPD-1小鼠的肿瘤浸润淋巴细胞中的表达。  

从接种了MC38肿瘤细胞30天的野生型小鼠和hPD-1小鼠中分离肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）。hPD-1小鼠在CD4⁺ T细胞和CD8⁺ T细胞上表达hPD-1蛋白，野生型小鼠在CD4⁺ T细胞和CD8⁺ T细胞上表达mPD-1蛋白。

• PD-1功能检测

图3. T细胞活化（IL-2的产生和扩增）在野生型小鼠和PD-1人源化小鼠之间没有差别。

A. 采用ELISA法测定野生型小鼠和PD-1人源化小鼠αCD3/αCD28活化脾细胞的上清液中IL-2的产生情况，两者没有差别。

B. αCD3激活的脾细胞和淋巴结（LN）中的 CD4⁺T细胞亚群（CD4⁺CD25^-），CFSE标记显示在两种小鼠之间的活化CD4⁺T细胞亚群的数量没有明显差别。

• 体内药效实验

图4. 人源化PD-1小鼠体内观察到hPD-1单抗的抗肿瘤活性。

A）hPD-1小鼠接种MC38小鼠结直肠癌细胞28天后，分别用A、B、C三种αhPD-1单抗以及同型对照处理后的肿瘤体积。（B）野生型和hPD-1小鼠颅内接种GL261小鼠胶质瘤细胞后，用αhPD-1抗体或αmPD-1抗体处理。αhPD-1抗体处理能够显著提高hPD-1小鼠的生存率。