【详解】腺相关病毒(AAV)在动物实验中的应用

日期: 2017年04月20日


    

腺相关病毒(AAV)简介


赛业生物/--腺相关病毒属于微小病毒科 (parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒,基因组大小约 4.7 kb。利用腺相关病毒可以将外源基因转入动物组织和细胞中,具有安全性高、免疫原性低、宿主范围广、表达稳定等多种优点,广泛应用于动物体内研究。


腺相关病毒血清型众多(12种),不同血清型对不同组织亲和性不同。因此在具体科学研究中,以下问题往往困扰着广大科研工作者:选择何种血清型?如何注射?注射多少病毒?注射部位如何选择?注射多久检测?


小赛就常见的注射部位(大脑、视网膜、肝脏、心脏和动脉、肺脏、肾脏、肌肉、肠)和方法做一个简单的归纳,为大家提供一个概念和思路。


大脑


大脑组织常用血清型有 AAV1,AAV2,AAV5,AAV8 和 AAV9,其中神经组织常见的血清型有 AAV2,AAV5 和 AAV8。对大脑组织而言,AAV5 应用范围更广,AAV8 更有效(值得注意的是,在猴子的神经组织中,AAV5 更有效)。从作用效果上看,AAV8 大于 AAV1。


针对大脑组织不同部位,AAV 不同血清型靶向性有所差异:


1)海马组织:AAV9 比 AAV8 更有效;


2)神经组织不同的细胞,不同血清型靶向性不同:如神经元常用的血清型有AAV1、AAV2、AAV5 和 AAV9;星形胶质细胞和少突胶质细胞常用的血清型有 AAV1 和 AAV5 。


总体而言,在所有组织中,AAV2 适用性广且在脑部组织也有所体现,例如其可以达到大脑组织 75% 的区域。AAV2、AAV5、AAV8 和 AAV9 也比较常见,应根据不同组织进一步慎重选择,在此介绍几种特例:


1、肠神经系统(Enteric Nervous System ENS),是由神经细胞组成的复杂网络,遍布整个肠胃消化管道。其神经元的数量和脊髓相当(约1亿个神经细胞)。该神经系统在人体躯干下部,属于迷走神经,以薄层的形式分布于消化肌之间,调节消化。常用 AAV5、AAV6、AAV8 和 AAV9 ,AAV6 对肠神经胶质和神经元有一定的靶向性。注射部位可以选择降结肠,注射量和滴度: 滴度为 1.3 × 10^12 GC/ml的病毒注射 5 μl 即可。检测时间:注射后 2 周开始表达,2-6 周均有检测。


2、脑组织常见的血清型为 AAV9,注射方法:左心室注射或者侧脑室注射。注射剂量和滴度:选择滴度为 0.5–4.0×10^11 GC/ml 的病毒液,稀释成 100 μl ,注射两周之后(14d) 开始检测。下图为一些脑部组织注射情况:

 

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