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为什么采用双gRNA打靶+电转法构建基因敲除细胞株?


    

基因敲除细胞株

 

基因敲除细胞株模型是开展基因功能研究、靶点验证及药物筛选的重要工具。但业内大部分机构利用CRISPR/Cas9系统对细胞基因进行敲除均为移码突变,敲除不彻底,赛业基于传统CRISPR/Cas9升级而成的CRISPR-Pro技术,可实现细胞株大片段基因敲除,采用电转方式进行转染,双gRNA同时打靶,可实现基因组片段敲除,敲除更彻底。

 

对比项目 双gRNA打靶+电转法 移码突变+病毒包装法
敲除是否彻底 敲除更彻底。删除大片段的碱基, 可以敲除所有的转录本,一些未知 的转录本也很大机会被敲除,敲除 更彻底。 敲除不彻底。有些未知转录本比较靠后因此无法被敲除,这样使得未被敲除的转录本蛋白仍有表达,敲除不彻底。
删除的碱基 删除大片段的碱基 删除一个或多个碱基
鉴定难度 鉴定简单易行。PCR法即可直观鉴定有无敲除。 鉴定难度高。PCR无法进行鉴定有无敲除,必须测序鉴定才能确认。
是否需要病毒包装 不需要 需要
是否引入外源基因 不引入外源基因 引入重组慢病毒的基因组
周期 周期短,2-3个月 周期长,3-5个月
价格 便宜

 

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