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《鼠年说鼠》第十二期:如何选择PCR胶浓度、电泳电压及时间?

《鼠年说鼠》系列文章,每周二更新,专门解答大小鼠铲屎官们在养鼠过程中经常遇到的繁育与鉴定类的问题,同时向大家征集问题,任何基因编辑鼠饲养繁殖或鉴定的困惑统统可以丢给小赛,小赛会给您回复或统一在后面的内容为大家做出详细的解答。

 

基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异,以小鼠基因组DNA为模板进行PCR,并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小,根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了PCR反应体系的选择,今天我们就开始学习PCR胶浓度、电泳电压及时间的选择。

 

《鼠年说鼠》第十二期:如何选择PCR胶浓度、电泳电压及时间?

 

PCR如何选择胶浓度?

根据PCR条带大小来确定,一般1kb以内用2.0~2.5%的TBE胶(0.5X TBE 缓冲液来配置);1kb以上用1.0~1.2%的TAE胶(1X TAE 缓冲液来配置);

 

5X TBE缓冲液母液的配制

1. 分别用电子天平称取下列物品放入烧杯中。

Tris 108g
硼酸 55g
Na2EDTA·2H2O 77.4g

2. 加800mL ddH2O使试剂溶解,倒入2L瓶中,定容至2L。

3. 使用时稀释十倍成0.5X TBE。

 

50X TAE缓冲液母液的配制

1. 称量Tris 484g,Na2EDTA·2H2O74.4g于2L烧杯中。

2. 向烧杯中加入ddH2O约1500mL,充分搅拌溶解。

3. 加入114.2mL的冰乙酸,充分搅拌。

4. 用ddH2O定容至2L后,室温保存,待用。

5. 使用时稀释50倍,即1X TAE。

 

电泳时的电压、时间?

根据电泳槽的规格来确定, 看电泳槽多大,两电极直接的距离,每cm 4~7V。例如一个20cm的电泳槽,电压就应该设为80~140V间;电泳时间是根据电压来确定,一般是20~30min。

 

每个点样孔要多少μl样品?

一般按照报告中的35个循环扩出的样品,只需要点5μl即可。

 

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