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我刚进实验室时,接触细胞实验,拿30瓶细胞做转染,转染24小时后,显微镜下看到顿时傻眼了,细胞转染率特别低,根本无法做下游实验!最后无奈地把细胞全扔掉。老板知道后,默默地盯着我看了十分钟。然后平时一日三次问实验进展的老板一星期没问候我。


做细胞学实验真心不易,稍不留神就会失败。做瞬转细胞系,一般情况下最多能够稳定表达一周左右,而且表达结果不稳定,有内源性表达的干扰;做稳转细胞系,理论上只要构建成功就能稳定表达,而且没有表达时间限制。但这也不是绝对的,一般构建的细胞系超过10代以后,这个细胞系就有可能不靠谱了。此外,想要获得较高的转染率,除了不能使用传代多次的细胞,还要控制细胞的生长密度,还要进行常规筛查防止各种微生物的污染,还要防止交叉污染·······。然而,即使严格按照实验流程来操作,也可能得不到预期的结果。


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