杜氏肌营养不良机理研究及有哪些小鼠模型？杜氏肌营养不良治疗方式有哪些?

mdx小鼠模型：

基因双敲除（double knock out, DKO）鼠模型：

Dmd^mdx大鼠模型：

犬类模型：

对症治疗药物

基因替代治疗：

是在DMD患者的基因组中插入外源的功能性DMD基因，从而恢复DMD患者骨骼肌、心肌细胞表达有功能的抗肌萎缩蛋白（如图3）。但由于DMD基因大，腺相关病毒（AAV）装载容量有限，一般采用截短的微型DMD基因 （microdystrophin）。研究者在mdx小鼠模型中，局部注射缺少70％编码序列的微型Dys，可保护mdx小鼠的四肢肌肉和心脏功能。同样，在GRMD的犬模型中也实现了肌肉功能改善。但基因替代治疗不适用于体内含有抗AAV抗体的患者，这类患者约占所有DMD的50%，因对病毒衣壳有免疫反应，可能对微型Dys本身产生体液或细胞免疫反应，故这类病人禁止接受AAV基因疗法。目前，针对AAV介导的微型抗肌萎缩蛋白基因治疗正开展多项临床试验，也有研究通过双重腺相关病毒技术和慢病毒载体提高基因载体的容量，有望装载全长的DMD基因。

外显子跳跃治疗：

是利用特异性反义寡核苷酸在DMD基因前信使RNA剪接过程中，排除特定外显子以重建阅读框，将突变类型纠正为整码突变，这样大多数DMD患者（见图4）在理论上可以产生截短的、但功能正常的Dys，是DMD治疗的又一策略（见图5）。FDA在2016年批准的eteplirsen是一种能够跳跃51号外显子的反义核苷酸，适用于大约13%的DMD患者治疗。使用etepliesen长期治疗能促进有功能的Dystrophin蛋白表达，延缓患者呼吸功能的下降，目前处于3期临床试验。外显子跳跃治疗也具有其局限性，例如转导不足、尤其是在心脏组织中，转导效率低下，组织摄入不稳定，需要频繁用药才能达到治疗效果。为进一步提高外显子跳跃治疗效率，对提高反义寡核苷酸的传递或吸收的研究正在进行。

基因编辑治疗：

利用细胞自身的修复机制非同源末端链接（Non-homologous end joining, NHEJ）或同源重组（Homologous Recombination, HR）所致随机插入和 （或）缺失，在原基因座位修复突变基因。工程核酸酶可通过切割DNA双链结构的特定序列，诱发修复位点断裂，从而达到原位基因编辑的目的（见图6）。目前基因编辑治疗仍处于体外细胞和动物实验阶段，对于应用于人体的安全性和有效性还需进一步临床试验证实。基因组编辑是在DNA水平上进行的，因此被编辑基因产生的所有RNA转录本来都是自身产生的，理论上这就排除了重复治疗的需要；但基因编辑治疗不能完全预防与DMD相关的肌肉损伤，一旦发生大规模的肌肉损伤，多核纤维中前期已接受基因组编辑过的细胞核就会丢失。因此，患者仍有可能随着时间的推移，部分Dys水平逐渐下降。DMD基因组编辑治疗的长期有效性，还需进行长期的研究。

终止密码子通读治疗：

又称为无义突变通读治疗，一些化合物通过与核糖体的结合，阻止终止密码子的信号识别，从而跳过这个错误的终止密码子，诱导提早出现的终止密码通读，从而继续翻译Dys（见图7）。该方法适用于所有无义突变DMD患者，其占总患者人群的10％-15％。