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细胞:质检报告(细菌、真菌、支原体、内毒素、增殖能力、传代能力、流式鉴定、诱导分化能力等)。

培养基:质检报告(细菌、真菌、支原体、内毒素)、注射级别用水、针对特定种属经过血清筛选(干细胞专用胎牛血清)。

细胞:细胞接收之后请检查干冰、细胞冷冻管是否有融化、解冻情形,若有请及时联系我公司售后人员(020-28069038)。如不马上复苏必须立即置于液氮保存,保存时间可长达几年。

培养基:添加物和基础培养基按照标签所示温度分开保存时间为1年;混合之后必须避光保存在2-8℃,推荐在一个月内使用完。同时减少敞开盖子的时间,避免培养基pH变化导致使用效果不佳。 

培养基出现的絮状物是血清融解过程中所释出的蛋白,不同批次的培养基蛋白释出的情况也不同,属于正常现象。

(1)针对特定种属细胞优化的培养体系;

(2)多个方向诱导:成骨、成脂、成软骨、成肝、成神经元、成星形胶质、EB形成等;

(3)性能稳定,诱导分化效果好。

(1)诱导之前铺被明胶(0.1%),以防止成骨诱导后期细胞出现成片脱落的现象;       

(2)诱导起始点:细胞汇合度达到65%-70%时开始换用诱导液;

(3)诱导2-3天进行换液时动作需轻柔,液体沿6孔板壁加入,以防止已形成的钙结节被冲刷掉;

(4)固定时间为30min不宜太长,茜素红染色时间控制在5min。 

干细胞在成骨诱导过程中还会继续增殖,当细胞增殖到一定程度的时候,单层贴壁细胞就会变得容易回缩脱落。故成骨诱导前,一般建议使用0.1%明胶对耗材表面进行处理20分钟,吸掉明胶后晾干方可接种细胞。当细胞达到70%汇合时可换成骨诱导液开始进行诱导。

 

干细胞在诱导前的状态、密度和纯度是诱导成骨成功与否的关键因素。干细胞在诱导前状态不好,密度低于70%,纯度不够都有可能使得诱导不成功。建议使用状态良好的,代次较早的细胞来进行成骨诱导,可适当延长换液时间,3天换液一次改成4天换液一次;或延长诱导时间。

(1)诱导起始点:细胞汇合度达到100%时开始换用诱导液A液;

(2)通常情况下是3天A液,1天B液进行循环诱导。实际操作过程中可以根据细胞状态适当增加或者缩短A液诱导的时间;

(3)换液动作需轻柔, 最后染色时油红O需要按照3:2(油红O:蒸馏水)进行稀释并用中性滤纸过滤之后方可使用。

(1)可能是IBMX加入前未充分溶解,加入后即产生沉淀,建议客户在混合前先水浴溶解,待充分溶解后再混合;

(2)培养基出现的沉淀物物可能是血清融解过程中所释出的蛋白,属于正常现象。

(1)染不上色的原因有可能是诱导没有成功,看不到明显的脂滴或者看到的是细胞空泡;若看到明显的脂滴但是染不上色,有可能是染色液失效。

(2)染色很浅的原因有可能是染色液失效或者染色液稀释的比例不对。

一般油红O产品的保存条件是4℃保存,染色前按油红O:1×PBS=3:2的比例稀释使用(染色前现配现用),稀释后会有明显沉淀出现,为了更好的实验效果,需要用滤纸过滤或者用离心的方法去掉沉淀。

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