免疫共沉淀CO-IP

免疫共沉淀CO-IP

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质功能的实验方法。Co-IP是在IP的基础上衍生出来的实验方法,是证明蛋白相互作用的金标准。通过检测免疫沉淀下来的蛋白复合物来证实中是否存在与X蛋白相互作用的Y蛋白。

 

其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗X蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体FC片段特异结合的Protein A/G-琼脂糖微珠,若细胞中有与Y结合的X蛋白,就可以形成这样一种复合物: Y—X—抗X抗体—Protein A或G ,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。