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基因敲除细胞株

基因敲除细胞系

在我们研究基因功能的时候,基因敲除(Knock out,KO)是实现基因loss of function的重要调控方式。相比于传统的基因干扰(RNAi)技术,基因敲除可完全消除目的基因的表达,最终使其蛋白完全不表达或功能彻底丧失,也让我们可以更好地观察细胞表型的变化。

但基因敲除细胞模型的构建过程较为繁琐,需要耗费很长的实验周期,而且对于经验不是很丰富的研究者,很容易出现做了三四个月却最终敲除效果不彻底的情况,导致研究进度受阻。

  

赛业生物细胞基因敲除服务

赛业生物基于人工智能的AlphaKnockout基因编辑专家系统和CRISPR/Cas9技术进行优化升级,开发了一套基因编辑效率更高的Smart-CRISPR基因编辑系统,可轻松实现细胞移码突变、片段敲除、多基因敲除等多种的敲除策略,并更好地解决蛋白残留表达的问题。根据我们过去上千个案例的服务经验,我们一般可将细胞的KO完整周期控制在7-12周,从而让客户更顺利地进行后续研究。

    

常见基因敲除细胞株类型

分类标准 类别
基因敲除策略 移码突变、片段敲除、多基因敲除等
细胞类型 肿瘤细胞、细胞株、IPS等

   

服务特色

1. 多种敲除策略

根据客户基因和细胞信息的不同,我们会采取最佳的敲除策略,极大提高目的基因敲除的成功率和蛋白的不表达效率。

 


2. 周期进一步缩短

赛业生物全面升级的细胞Smart-CRISPR基因编辑系统,将KO实验各流程充分优化,在确保实验结果的前提下达到最快的交付周期。

 

 

 

3. 详尽的结果交付

我们不仅提供构建成功的KO纯合子细胞株,同时根据客户要求还可提供多个不同克隆,如杂合子、阴性克隆,交付前细胞均会经过严格的无菌检测和细胞生长状态的验证。此外,与细胞一起交付的,还包括专业的实验报告和质检报告。

    

细胞敲除服务优势

1. 独创Smart-CRISPR技术:多种敲除策略,基因编辑效率显著提升,最大程度保证蛋白不表达。

2. 专业的项目管理:24h内快速出方案,定期反馈项目进展,博士团队技术支持,详尽的交付报告。

3. 严格的质控体系:双重检测细菌、支原体等微生物,100%确保无污染;并充分鉴定敲除效果。

4. 丰富的成功经验:超千例项目成功案例,超200种细胞株成功案例(如肿瘤细胞、细胞系和IPS等 ) ,客户多篇文献引用发表。

5. 细胞到动物的整体服务方案:提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立、到表型分析的全套服务。

 

成功基因编辑细胞类型精选

分类

细胞名称

缩写

血液和淋巴系统

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

RAW 264.7

人B淋巴母细胞

HMy2.CIR

人T淋巴细胞白血病细胞

HuT 78

人单核细胞白血病

THP-1

人慢性髓系白血病细胞

K-562

人原髓细胞白血病细胞

HL-60

人白血病T淋巴细胞

Jurkat, Clone E6-1

骨骼、皮肤系统

小鼠黑色素瘤细胞

B16

小鼠皮肤黑色素瘤细胞

B16-F10

人骨肉瘤细胞

U-2 OS

人恶性黑色素瘤细胞

A375

人纤维肉瘤细胞

HT-1080

消化系统

小鼠结肠癌细胞

CT26.WT

人回盲肠癌细胞

HCT-8

人结肠癌细胞

HCT 116

HT-29

人结肠腺癌细胞

SW480

人结直肠癌细胞

LoVo

人食管鳞癌细胞

KYSE-150

人胃癌细胞

HGC-27

呼吸系统

小鼠肺癌细胞

LLC

仓鼠肺细胞

V79

人正常肺上皮细胞

BEAS-2B

人大细胞肺癌细胞

NCI-H460

人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1299

A549

人肺鳞癌细胞

SK-MES-1

NCI-H520

泌尿系统

小鼠肾小球系膜细胞

SV40 MES 13

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞

PC-12

大鼠肾细胞

NRK

非洲绿猴肾细胞

Vero

恒河猴肾细胞

LLC-MK2

人膀胱癌细胞

5637

人前列腺癌细胞

PC-3

人胚肾细胞

293 Cells, low passage

人肾细胞腺癌细胞

786-O

ACHN

脑和神经系统

小鼠垂体瘤细胞

AtT-20

大鼠胶质瘤细胞

C6

人胶质瘤细胞

U251

人神经母细胞瘤细胞

SK-N-SH

内分泌系统

小鼠乳腺癌细胞

4T1

人乳腺癌细胞

MCF-7

MDA-MB-231

生殖系统

仓鼠卵巢细胞亚株

CHO-K1

人宫颈癌细胞

Hela

人卵巢癌细胞

SK-OV-3

循环系统

小鼠成肌细胞

C2C12

大鼠成肌细胞

L6

大鼠心肌细胞

H9c2(2-1)

  

细胞敲除成功案例

项目名称:人HCT116细胞PSME3基因敲除(片段敲除)

 

1、gRNA设计:

gRNA位点1:ATACGCTACCTAACATGGCTGGG; gRNA位点2:CCAGCATGCAAAATACAATGGGG

 

2、引物合成及质粒构建:

 

 

3、细胞转染

首先确定最佳的电转参数,进而通过电转的方式将载体转染进细胞。

 

4、筛选单克隆细胞并培养

 

 

5、PCR及电泳鉴定:

鉴定策略的原理如下:

 

 

6、测序鉴定:

ATAAACAGAGGATTTAAGACTTTTGTTATGTTTTAGACGC-del;1809bp--AGTGGCTAATGCCT GTAATCC CACCACTTTGGGAGGCCAA

 

 

7、克隆状态:

细胞检测结果:无菌、无支原体

培养体系:McCoy‘s 5A+ 10% FBS + 500μg/mL Hygromycin;1:3传代

 

 

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