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过表达细胞株

基因过表达细胞株技术背景

许多研究者在研究基因功能时,会同时进行基因干扰和基因过表达,让实验结论更严谨。基因过表达是指通过慢病毒、电转等细胞转染方式,在细胞内提高特定基因的表达水平,从而实现基因的功能增强(gain of function),基因过表达作为一种传统的分子生物学技术至今依然在生物学研究中发挥着重要作用。

 

赛业生物基因过表达服务介绍

赛业生物建立了一套成熟稳定的基因干扰表达的实验体系,可针对多种不同细胞(包括难转染细胞)为您提供基因过表达稳转细胞株的构建服务。

 

1、高调控效率

可实现几十、百倍的过表达水平,经调控后的表达显著升高。

 

2、性状稳定不恢复

我们构建的过表达细胞株,经过十几代甚至更高的细胞传代后,仍然维持稳定的过表达性状。

 

3、多种调控策略选择

针对不同的基因和细胞特征,可优选不同的实验体系,达到最佳调控效果。如:

实验方法

特点

慢病毒法

高感染效率,实现长期、稳定、显著的过表达效果。

转座子法

省去病毒包装和纯化过程,缩短实验流程;可装载上百kb的大基因片段。

  

4详尽的结果交付

  • 实验报告:含实验基本流程、载体报告、引物序列、稳转株鉴定结果等信息;
  • 测序报告;
  • 稳转细胞株2管/株(1×106细胞/管),包含对照细胞株;
  • 剩余病毒(选)、甘油菌(选)。

 

基因过表达实验流程与周期示意图 


   

服务优势

1. 丰富的成功经验:超千例项目成功案例,超200种细胞株成功案例,客户多篇文献引用发表。

2. 专业的项目管理:24h内快速出方案,定期反馈项目进展,博士团队技术支持,详尽的交付报告。

3. 严格的质控体系:双重检测细菌、支原体等微生物,100%确保无污染,并充分鉴定目的基因过表达效果。

4. 细胞到动物的整体服务方案:提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立、到表型分析的全套服务。

 

 
成功案例

项目名称:构建mMaf基因过表达的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)

1、mMaf慢病毒过表达载体设计:


 

2、病毒包装

将上述表达载体包装慢病毒并进行滴度检测,确保病毒质量满足后续实验要求。

3、小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)鉴定

细菌、真菌、支原体等检测,确保小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)无微生物污染;

4、病毒转导稳转株构建

mMaf过表达慢病毒和阴性空载慢病毒转小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),并使用嘌呤霉素药筛,最终获得1株过表达稳转细胞株和1株对照组稳转细胞株。细胞株各冻存2管,

细胞量1×106/管。细胞分组如下:

过表达组- Pn+4 -100x

对照组- Pn+4 -100x

 

5、qPCR 检测

 

 

 

 

 

 

 

 

mGapdh的溶解曲线

 

 

 

 

 

 

 

mMaf的溶解曲线

 

相对定量的方法检测目的基因的表达变化,按照2-ΔΔCT法对数据进行分析处理

样品名称

ΔΔCT

(实验组-对照组)

2-ΔΔCT

表达效率

mMaf

mGapdh

过表达组

22.67

17.34

-7.27

155.02858

15502.86 %

对照组

29.15

16.55

0

1

100.0%

  

 

成功基因编辑细胞类型精选

分类

细胞名称

缩写

血液和淋巴系统

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

RAW 264.7

人B淋巴母细胞

HMy2.CIR

人T淋巴细胞白血病细胞

HuT 78

人单核细胞白血病

THP-1

人慢性髓系白血病细胞

K-562

人原髓细胞白血病细胞

HL-60

人白血病T淋巴细胞

Jurkat, Clone E6-1

骨骼、皮肤系统

小鼠黑色素瘤细胞

B16

小鼠皮肤黑色素瘤细胞

B16-F10

人骨肉瘤细胞

U-2 OS

人恶性黑色素瘤细胞

A375

人纤维肉瘤细胞

HT-1080

消化系统

小鼠结肠癌细胞

CT26.WT

人回盲肠癌细胞

HCT-8

人结肠癌细胞

HCT 116

HT-29

人结肠腺癌细胞

SW480

人结直肠癌细胞

LoVo

人食管鳞癌细胞

KYSE-150

人胃癌细胞

HGC-27

呼吸系统

小鼠肺癌细胞

LLC

仓鼠肺细胞

V79

人正常肺上皮细胞

BEAS-2B

人大细胞肺癌细胞

NCI-H460

人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1299

A549

人肺鳞癌细胞

SK-MES-1

NCI-H520

泌尿系统

小鼠肾小球系膜细胞

SV40 MES 13

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞

PC-12

大鼠肾细胞

NRK

非洲绿猴肾细胞

Vero

恒河猴肾细胞

LLC-MK2

人膀胱癌细胞

5637

人前列腺癌细胞

PC-3

人胚肾细胞

293 Cells, low passage

人肾细胞腺癌细胞

786-O

ACHN

脑和神经系统

小鼠垂体瘤细胞

AtT-20

大鼠胶质瘤细胞

C6

人胶质瘤细胞

U251

人神经母细胞瘤细胞

SK-N-SH

内分泌系统

小鼠乳腺癌细胞

4T1

人乳腺癌细胞

MCF-7

MDA-MB-231

生殖系统

仓鼠卵巢细胞亚株

CHO-K1

人宫颈癌细胞

Hela

人卵巢癌细胞

SK-OV-3

循环系统

小鼠成肌细胞

C2C12

大鼠成肌细胞

L6

大鼠心肌细胞

H9c2(2-1)

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