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稳转细胞株

稳转细胞株被广泛应用于基因功能研究、小鼠疾病模型建立、小分子药物和抗体药开发等场景。赛业生物建立了一套成熟稳定的基因干扰和过表达的实验体系,针对多种不同细胞(包括难转染细胞),均可提供稳转细胞株的构建服务。

 

服务内容

  • 基因编辑细胞株
服务项目 服务内容 交付标准 周期

过表达

稳转株

组成型(慢病毒法)

稳转cell pool,2管(106细胞/管)

1个单克隆,2管(106细胞/管)

对照cell pool,2管(106细胞/管)

实验报告(含实验基本流程、载体报告、

引物序列、稳转株鉴定结果等信息)

Cell pool:8周起;

单克隆:12周起

诱导型(慢病毒法)
组成型(PB法)
诱导型(PB法)

干扰

稳转株

组成型干扰

诱导型干扰

 

  • 体外检测

服务项目

服务内容

交付标准

周期

DNA检测

PCR和测序

实验报告(含实验基本流程、检测结果和结论等信息)

1周起

mRNA检测

qPCR

蛋白检测

Western blot、流式(三激光十三色流式细胞仪)、

IF、ELISA

功能检测

Luciferase assay、cAMP、钙流、细胞增殖、

凋亡、周期、迁移/侵袭等

IPSC服务

相关检测

STR鉴定、免疫荧光、流式、核型分析、

体外三胚层分化、畸胎瘤等

细胞治疗服务

相关检测

免疫细胞表型检测、CAR-T/NK细胞增殖服务、

CAR-T/NK细胞杀伤服务、CAR-巨噬细胞吞噬实验服务、

细胞因子检测服务、抗体药ADCC和ADPC服务

 

实验流程与周期示意图 

 

服务优势

  • 丰富的成功经验

超千例项目成功案例,超250种靶细胞经验,客户多篇文献引用发表。

  • 多种转染或感染方式

慢病毒、PB转座子等多种策略。

  • 高调控效率和性状稳定

可实现几十、百倍的过表达水平,经过十几代甚至更高的细胞传代后,仍然维持稳定的过表达性状。

  • 丰富多样的体外检测

提供从基因、mRNA、蛋白到功能等全套体外检测服务。

  • 严格的质控体系

双重检测细菌、支原体等微生物,100%确保无污染;进行细胞活率检测,保证交付质量。

  • 细胞到动物的整体服务方案

提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立到表型分析的全套服务。

 

服务案例

  • 肿瘤模型细胞株构建

   

1. MCF-7/luciferase细胞构建和鉴定结果。(A . Luciferase assay结果:luciferase高表达1000倍以上,显示成功构建MCF-7/luciferase细胞株;B. MCF-7/luc细胞株接种小鼠体内成像:显示MCF-7/luciferase细胞株可以在体内成瘤;C. 取骨后荧光成像:显示成功构建乳腺癌骨转移模型。)

 

  • 抗原表达稳转细胞株构建

   

2. K562稳转细胞株构建流式结果。K562过表达细胞株相比于对照细胞有一个log shift的位移,且阳性率为99.86%,表明成功构建K562过表达稳转株。

 

  • 诱导型过表达细胞株构建

图3. 基因A诱导型过表达细胞构建和鉴定结果。基因 A过表达细胞株在DOX诱导下,相比于对照细胞有10倍以上表达,表明成功构建基因 A诱导型过表达株。

 

  • 体外药效评价服务

4. CD19 CAR-T细胞体外药效评价实验检测结构。A. CD19 CAR分子结构图示;B. CD19 CAR-T细胞阳性率检测结果;C. Nalm6细胞CD19抗原阳性率检测结果;D. CD19 CAR -T杀伤Nalm6细胞实验统计结果,显示CD19 CAR-T细胞对Nalm6细胞具有显著增强的杀伤作用;E. 杀伤实验上清中IFN-γ含量检测结果, 显示同Nalm6细胞共孵育后CD19 CAR-T细胞的IFN-γ分泌能力均显著增强。

 

成功基因编辑细胞类型精选

分类

细胞名称

缩写

血液和淋巴系统

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

RAW 264.7

人B淋巴母细胞

HMy2.CIR

人T淋巴细胞白血病细胞

HuT 78

人单核细胞白血病

THP-1

人慢性髓系白血病细胞

K-562

人原髓细胞白血病细胞

HL-60

人白血病T淋巴细胞

Jurkat, Clone E6-1

骨骼、皮肤系统

小鼠黑色素瘤细胞

B16

小鼠皮肤黑色素瘤细胞

B16-F10

人骨肉瘤细胞

U-2 OS

人恶性黑色素瘤细胞

A375

人纤维肉瘤细胞

HT-1080

消化系统

小鼠结肠癌细胞

CT26.WT

人回盲肠癌细胞

HCT-8

人结肠癌细胞

HCT 116

HT-29

人结肠腺癌细胞

SW480

人结直肠癌细胞

LoVo

人食管鳞癌细胞

KYSE-150

人胃癌细胞

HGC-27

呼吸系统

小鼠肺癌细胞

LLC

仓鼠肺细胞

V79

人正常肺上皮细胞

BEAS-2B

人大细胞肺癌细胞

NCI-H460

人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1299

A549

人肺鳞癌细胞

SK-MES-1

NCI-H520

泌尿系统

小鼠肾小球系膜细胞

SV40 MES 13

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞

PC-12

大鼠肾细胞

NRK

非洲绿猴肾细胞

Vero

恒河猴肾细胞

LLC-MK2

人膀胱癌细胞

5637

人前列腺癌细胞

PC-3

人胚肾细胞

293 Cells, low passage

人肾细胞腺癌细胞

786-O

ACHN

脑和神经系统

小鼠垂体瘤细胞

AtT-20

大鼠胶质瘤细胞

C6

人胶质瘤细胞

U251

人神经母细胞瘤细胞

SK-N-SH

内分泌系统

小鼠乳腺癌细胞

4T1

人乳腺癌细胞

MCF-7

MDA-MB-231

生殖系统

仓鼠卵巢细胞亚株

CHO-K1

人宫颈癌细胞

Hela

人卵巢癌细胞

SK-OV-3

循环系统

小鼠成肌细胞

C2C12

大鼠成肌细胞

L6

大鼠心肌细胞

H9c2(2-1)

 

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