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慢病毒载体制备平台

赛业生物依据多年的病毒包装平台经验,可提供不同质量标准的慢病毒(LV)包装服务,广泛运用到各种细胞系模型的构建,特别对于较难感染的原代细胞,如T细胞和NK细胞。针对CAR-T细胞治疗,我们还可提供不同靶点的CAR分子设计服务,满足CAR-T及细胞治疗研究者的个性化需求。

 

服务项目

抗体筛选服务
多样性CAR分子设计服务
科研级慢病毒包装服务
  • 全人源抗体文库
  • 全人源抗体小鼠
  • 经典CAR分子结构设计
  • 高度个性化CAR设计
  • 过表达慢病毒、干扰慢病毒、基因敲除慢病毒
  • 高滴度、高纯度、高活性、高效感染效果

 

服务优势

  • 全人源化抗体小鼠免疫,更快获得scFv序列
  • 基于人源抗体文库的人源抗体开发与抗体优化
  • 各种靶点的CAR分子及载体设计,满足个性化需求
  • 种类丰富的载体库,大大缩短实验周期
  • 成熟的慢病毒包装技术
  • 严格的病毒质控标准,感染效果有保证

 

CAR分子设计

  • scFv筛选:利用抗体开发和筛选,选出3-5个结合亲和力合适的scFv分子
  • 连接基团(Linker)的优化:设计不同长度的Linker,使VH和VL之间的灵活度增加,进而影响结合亲和力
  • 铰链区(Hinge)的优化:设计不同长度的Hinge,增加抗原结合域的空间灵活度
  • 共刺激结构域的选择:可选择不同的共刺激分子(如4-1BB或CD28等)
  • 报告基因:可连接绿色荧光蛋白基因,表征CAR分子是否转导成功

图1 CAR分子结构示意图

 

慢病毒包装技术路线

图2 慢病毒包装技术路线

 

病毒交付标准

高浓度活性病毒
×
专业的实验报告
×
严格的质检报告
×
详细的操作手册

 

服务案例

  • CD19抗原慢病毒滴度检测

将表达CD19抗原的慢病毒纯化液进行梯度稀释(0.01、0.1、1、10μL四个梯度),分别加入到相同数量的293T细胞中,72小时后流式检测293T细胞阳性率(即被慢病毒感染的293T细胞占细胞总数的百分比),进而计算慢病毒的转导滴度。如图所示,CD19抗原阳性细胞的数量随转染病毒梯度的增加而逐渐升高,表明该慢病毒有良好的感染活性,并计算病毒滴度为:1.4×108 TU/mL。

图3 CD19抗原慢病毒滴度检测结果

 

  • FMC63 CAR慢病毒滴度检测

我们设计了如下结构的靶向CD19抗原的FMC63 CAR分子,并将其构建慢病毒载体上,进行慢病毒制备。采用上述方法检测FMC63 CAR慢病毒滴度,病毒滴度约为:4.33×108 TU/mL。

 

图4 FMC63 CAR分子结构

 

图5 FMC63 CAR慢病毒滴度检测结果

 

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