基因治疗CRO

In Vivo AAV-CRISPR/Cas-mediated Gene Editing Ameliorates Atherosclerosis in Familial Hypercholesterolemia. Circulation (2019) doi: 10.1161/CIRCULATIONAHA.119.042476.

家族性高胆固醇血症（FH）是一种常见的遗传性高脂血症，通常由低密度脂蛋白受体（LDLR）基因突变所致。研究人员通过CRISPR/Cas构建了点突变小鼠模型，并采用AAV-CRISPR/Cas基因治疗技术，结果证实AAV-CRISPR/Cas系统对携带Ldlr突变的小鼠进行的LDLR基因校正能够部分地修复LDLR表达，并有效改善LDLR突变体中的动脉粥样硬化，为FH患者的治疗提供潜在的治疗方法。

该文章无论从研究思路与策略，再到技术方法，都为我们今后应用基因编辑小鼠模型，开展相关基因功能研究，疾病模型的建立，以及基因治疗方法及其效果评价提供了非常好的参考借鉴作用。点击阅读全文

• 技术路线

发现致病基因靶点

低密度脂蛋白受体(LDLR)

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构建点突变小鼠 LDLR^E208x

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家族性高胆固醇血症小鼠疾病模型成功建立

(验证有高胆固醇血症及动脉粥样硬化表型)

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AAV8-CRISPR/Cas基因疗法修正LDLR^E208x

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小鼠高胆固醇血症及动脉粥样硬化症状

得到缓解

图1 客户研究思路

图2 LDLR^E208X点突变模型构建与鉴定

图3 通过AAV-Crispr/Cas递送系统治疗动脉粥样硬化

PPA1 Regulates Systemic Insulin Sensitivity by Maintaining Adipocyte Mitochondria Function as a Novel PPARγ Target Gene. Diabets (2021) doi: 10.2337/db20-0622.

近年来研究表明胰岛素抵抗与代谢紊乱相关，为探讨PPA1对全身性胰岛素敏感性的影响，研究人员首先构建了PPA1基因敲除小鼠，通过高脂喂养后出现脂肪细胞功能损伤和全身代谢紊乱，并表现出多组织的胰岛素抵抗。进而通过AAV递送系统使PPA1基因敲除小鼠体内过表达PPA1，发现全身性代谢紊乱和胰岛素抵抗得到了显著改善，进一步证实PPA1可作为PPARγ靶基因，起到维持脂肪细胞线粒体功能并达到调节全身胰岛素敏感性的作用。

基于AAV载体的基因治疗在近年来备受关注，该文章证实了通过AAV调控相关基因表达，可缓解全身性代谢紊乱，从而提高胰岛素敏感性，为人类肥胖相关代谢性疾病提供了新的治疗策略。点击阅读全文

• 技术路线

构建PPA1基因敲除小鼠，并
观察到胰岛素敏感性下降

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高脂喂养PPA1敲除小鼠，出现脂肪细胞功能损伤和全身性代谢紊乱

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AAV2/9注射小鼠，补充PPA1
基因的表达，观察到胰岛素敏
感性显著提升

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PPA1通过影响脂肪细胞线粒体功能及其产物从而影响代谢紊乱

图4 客户研究思路

图5 高脂喂养小鼠脂肪量减少和异位脂肪沉积增加

图6 PPA1缺陷引起脂肪组织损伤与全身胰岛素抵抗有关

Delivery of nVEGFi using AAV8 for the treatment of neovascular age-related macular degeneration.Methods & Clinical Development (2022) DOI: 10.1016/j.omtm.2022.01.002

新生血管性AMD以脉络膜新生血管（CNV）为特征，并伴有渗出、视网膜内和视网膜下出血、视网膜色素上皮脱离、硬性渗出物或视网膜下纤维瘢痕。研究人员通过，小鼠眼底激光诱导出了小鼠的疾病模型，并根据抑制新生血管的生成的作用机制设计了可以阻断血管内皮生长因子（VEGF）的AAV-antiVEGF的药物，结果证实AAV-antiVEGF对激光诱导的小鼠脉络膜新生血管有抑制作用，能有效的阻止AMD疾病的进展，为黄斑变性患者的治疗提供了潜在的治疗方法。该文章无论从研究思路和策略，再到技术方法，都为我们今后应用小动物疾病诱导模型，开展相关基因功能研究，以及基因治疗方法及其效果评价提供了非常好的参考借鉴作用。

• 技术路线

图7 客户研究思路

图8 体外药效验证图，验证了nVEGFi能在体外高效的和VEGF结合

图9 体内药效实验流程图，验证了nVEGFi确实能抑制wAMD的表型产生