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慢病毒包装

慢病毒包装

赛业生物采用第3代重组慢病毒包装系统制备病毒颗粒。为了增加慢病毒的安全性能,病毒制备所必需的元件序列被拆分到4个质粒当中,分别是:
11个编码目的基因的慢病毒转移质粒。目的基因两侧各有一个LTR(long terminal repeat)序列,LTR序列促使目的基因整合到目的细胞基因组里。为了提高安全性能,转移质粒的3’ LTR缺失了部分序列,使得整合后的病毒基因组失去自我复制能力。
22个包装质粒。其中一个质粒编码Rev, 另外一个质粒编码Gag和Pol。
31个编码包膜蛋白的质粒。

利用上述质粒包装出来的重组慢病毒颗粒,被称为自我失活VSV-G假型慢病毒(self-inactivating VSV-G pseudotyped lentivirus)。

 

  

慢病毒包装

生产携带目的基因的重组慢病毒颗粒,过程如下图:

首先将转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒转染到293T细胞。更换新鲜的培养基后,继续培养48~72小时。收集培养液,进行离心浓缩后,就可得到转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的超纯病毒颗粒,可以利用蔗糖超速离心进一步去除杂质,从而获得纯度更高的病毒颗粒。    

 

质量控制

我们会对每一批病毒都进行滴度检测,严格控制质量,让你百分百放心。针对用携带荧光报告基因的转移质粒生产的病毒,我们会先用荧光法检测病毒的转导率,如能达到使用要求,再进一步采用qPCR法检测病毒滴度。

 

服务明细

服务 交付标准 周期 推荐用途
标准规格包装 冷冻病毒 (滴度: ≥1×108 TU/ml, 体积: 1ml) 2-3周 细胞转导
大规格包装 冷冻病毒 (滴度: ≥1×109 TU/ml, 体积: 1ml) 2-3周 细胞转导

 

赛业生物不仅仅提供基因表达慢病毒定制服务,还提供shRNA干扰慢病毒和gRNA慢病毒定制服务。您可根据实验需要,选择一款适合于您的重组慢病毒来开展基因功能研究工作。

  

CRISPR/ Cas9基因敲除慢病毒载体

  

CRISPR基因敲除慢病毒系统包括两个载体:

1gRNA慢病毒载体

 

gRNA慢病毒载体由慢病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUC ori。慢病毒基因组序列是从元件5’LTR开始,到3’LTR结束。

 

2Cas9慢病毒载体

 

Cas9慢病毒载体利用CBh启动子共表达humanized Cas9基因和抗药性基因。gRNA慢病毒载体利用U6 promoter表达gRNA,同时携带了一个表达抗药性基因的基因表达盒子。在设计gRNA慢病毒载体时,请选择合适的抗药性基因,两个载体需要不同的抗药性基因配套使用才能筛选出共表达gRNA和Cas9的细胞。

   

质量控制

我们会对每一个CRISPR/Cas9慢病毒载体挑克隆,并测序gRNA片段。测序正确后,再进行酶切鉴定,酶切鉴定合格后交付。

 

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