CAR-T细胞构建|无鼠源T/B/NK细胞|体外体内评价模型构建-赛业生物

赛业生物长期致力于肿瘤细胞模型和动物肿瘤模型的构建，拥有经验丰富的专家团队和成熟稳定的技术平台，可提供免疫细胞治疗相关的各种细胞模型和动物模型。针对CAR-T及其他细胞治疗研究，我们已建立了丰富的肿瘤免疫研究的细胞和小鼠模型库，并为国内外科研院所、医院、制药企业和生物公司提供临床前体内/外药理药效学评价服务。

赛业生物自主研发的C-NKG重度免疫缺陷小鼠，无鼠源T/B/NK细胞，且髓系组分显著缺陷，可用于构建各种CDX模型和人免疫系统重建小鼠模型。

服务项目

细胞模型构建

- CAR-T/CAR-NK等细胞构建
- 表达肿瘤靶点的细胞模型
- 荧光素酶标记的肿瘤细胞
- 其他过表达细胞株

体内评价模型构建

模型种类	模型名称
免疫缺陷小鼠模型	C-NKG小鼠； NOD scid小鼠；BALB/c nude小鼠
免疫系统人源化小鼠模型	PBMC人源化；HSC人源化
疾病模型	肺癌、结直肠癌、乳腺癌、黑色素瘤等
CDX/PDX/同源肿瘤小鼠模型	皮下接种、腹腔接种、尾静脉注射、原位接种

服务优势

体外评价模型	多种肿瘤模型	HIS模型
抗原表达稳定，且经多次传代后不会丢失 CAR分子高表达效率荧光素酶标记现货细胞，体外杀伤验证、体内实时监控多种验证方式，模型充分鉴定	多种肿瘤细胞的成瘤经验，覆盖实体瘤和血液瘤小鼠状态稳定，实验重复性高，结果数据可靠高标准的动物实验操作与饲养环境	可提供PBMC和HSC不同重建方式，人源化程度高小鼠存活率高，实验窗口期长模型均一性好，数据更具说服力

服务案例

细胞模型

- CD19过表达细胞株构建

通过慢病毒感染构建CD19稳定表达的293T细胞株，并采用流式检测其抗原CD19的表达。

图1 流式检测CD19-293T稳转细胞株CD19抗原高表达

- CAR-T细胞表型分析

对活化扩增后的PBMC进行检测，结果显示成功获得高纯度的T细胞，其占比高达90%以上，T细胞的亚型分析结果显示CD4+和CD8+细胞占比分别为：37.24%和54.41%。

图2 PBMC活化扩增第十天T细胞占比及表型分析实验结果

- FMC63 CAR-T细胞构建

通过慢病毒转导构建FMC63 CAR-T细胞，并使用FMC63 scFv抗体对FMC63 CAR-T细胞进行标记，FMC63 CAR的阳性率为16.99%，表明成功构建了FMC63 CAR-T细胞。

图3 FMC63 CAR阳性率检测

动物模型

- C-NKG重度免疫缺陷小鼠

缺乏成熟的T、B、NK免疫细胞，补体活性降低，巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱、树突状细胞功能下降，可高效地移植CDX和PDX，移植人PBMC或HSC进行人免疫系统重建，是目前公认的免疫缺陷程度高的优秀模型，可用于肿瘤、自身免疫性疾病、GvHD/移植等研究。

图4 C-NKG小鼠外周血（上）、淋巴组织（下）中的B、T、NK细胞表型检测，结果表明C-NKG小鼠缺乏成熟的T、B和NK细胞

- CDX模型构建

对C-NKG小鼠和N*G小鼠进行人急性淋巴细胞白血病建模：向小鼠接种200μL PBS（对照组）、 5×10⁵ Luci-Nalm6细胞、1×10⁶ Luci-Nalm6细胞，右图为在第21天检测的活体成像图以及平均荧光强度图，可见人急性淋巴细胞白血病建模成功，C-NKG小鼠体内肿瘤的生长速度相较N*G小鼠更快。

图5 肿瘤细胞接种第21天的小动物活体成像图6 肿瘤细胞接种第21天的生物发光强度

肿瘤免疫模型构建平台