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肿瘤免疫模型构建平台

目前细胞治疗多应用于肿瘤领域,因此常需要构建稳定的肿瘤细胞模型和动物模型来对治疗效果进行评价。影响CAR-T细胞效力的因素有很多,如转染效率、培养条件和细胞类型等,而体外细胞模型,为CAR-T疗法的有效性和特异性评估提供了多种检测手段。对于体内评价模型,则要求模型不排斥CAR-T细胞或者具备宿主的免疫环境等基本特性,且实验动物要有良好的生存状态及稳定性。另外,也可采用同源肿瘤移植小鼠模型对CAR-T的作用机制及治疗原理进行验证。

赛业生物长期致力于基因编辑细胞和动物模型的建立,拥有经验丰富的专家团队和成熟稳定的技术平台,可提供细胞模型和动物模型。针对CAR-T及细胞治疗研究,我们已建立了丰富的供肿瘤免疫研究的细胞和小鼠模型库,并为国内外科研院所、医院、制药企业和生物公司提供临床前体内/外药理药效学评价服务,例如,赛业生物自主研发的C-NKG重度联合免疫缺陷小鼠,无鼠源T/B/NK细胞,且髓系组分存在缺陷,可用于构建各种CDX模型和人免疫系统重建小鼠模型。
 

一、体外评价模型构建

服务项目

模型类型 模型名称

细胞模型

表达肿瘤靶点的细胞模型
荧光素酶标记的肿瘤细胞
CAR-T细胞构建
其他过表达细胞株
 
服务优势:
  • 抗原表达稳定、程度高,且经多次传代后不会丢失;
  • CAR分子高表达效率;
  • 多种验证方案,模型构建充分鉴定。
 

服务案例

1、CD19-293T细胞株构建

通过慢病毒感染构建CD19稳定表达的293T细胞株,并采用流式检测其抗原CD19的表达。

 

图1. 流式检测CD19-293T稳转细胞株CD19抗原表达情况。

 

2、CAR-T细胞表型分析以及CAR阳性率检测结果

对活化扩增后的PBMC进行检测,结果显示成功获得高纯度的T细胞,其占高达90%以上,T细胞的亚型分析结果显示CD4+和CD8+细胞占比分别为:35.93%和49.45%。进而通过慢病毒转导构建FMC63 CAR-T细胞,并使用FMC63 scFv抗体对FMC63 CAR-T细胞进行标记,FMC63 CAR的阳性率为16.99%,表明成功构建了FMC63 CAR-T细胞。

 

 

图2. T细胞表型分析及FMC63 CAR-T细胞阳性率检测。上图. PBMC活化扩增第十天T细胞占比及表型分析实验结果。下图. FMC63 CAR-T细胞CAR阳性率检测结果。

 
二、体内评价模型

服务项目

模型类型
模型种类
模型名称

动物模型

免疫缺陷小鼠
BALB/c nude小鼠;NOD scid小鼠;C-NKG小鼠
免疫系统人源化小鼠
PBMC人源化;HSC人源化
CDX小鼠模型
皮下实体瘤模型;原位实体瘤模型;血液瘤模型
同源肿瘤小鼠模型
肺癌、结直肠癌、乳腺癌、黑色素瘤等同源肿瘤模型
 
服务优势

CDX模型服务优势:

  • 多种肿瘤细胞的成瘤经验,覆盖实体瘤和血液瘤;
  • 可有效支持各种肿瘤细胞建模;
  • 小鼠状态稳定,实验重复性高,结果数据可靠;
  • 高标准的动物实验操作与饲养环境。

 

HIS模型服务优势

  • 可提供PBMC和HSC不同重建方式,人源化程度高;
  • 小鼠存活率高,实验窗口期长;
  • 模型均一性好,数据更具说服力。
 

服务案例

1、重度免疫缺陷小鼠C-NKG鼠源免疫组分检测

图3. C-NKG小鼠外周血中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。

取BALB/c、 C-NKG小鼠的外周血,对其T 、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明 ,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠外周血中的B细胞(CD3- CD19+)、T细胞(CD3+ CD19-)、辅助性T细胞(CD3+ CD4+ CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+ CD4- CD8+)、NK细胞(CD335+ CD3-)几乎完全缺失。

2、精选CDX模型——非小细胞肺癌A549细胞皮下成瘤

图4. A549细胞皮下成瘤实验。A549细胞以皮下注射的形式接种到BALB/c nude,NOD scid和BRGSF小鼠中,在不同的时间点测量成瘤体积。

 

图5. 裸鼠皮下注射A549细胞6周后肿瘤形成图。

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