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病毒载体设计与开发

基因递送工具的选择是基因治疗中关键的一环,药物最终在人体发挥药效,很大程度取决于稳定、高效的递送系统。目前,基因治疗常用的载体包括病毒载体和非病毒载体,而病毒载体由于其宿主范围广,作用时间长,在基因治疗研究中应用越来越广泛,可以进行编码基因或非编码基因的过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作。常用工具病毒如腺相关病毒(AAV)、腺病毒(ADV)和慢病毒(LV),具有不同的感染特性。其中,AAV由于具有良好的组织特异性、低免疫原性及高安全性等优势,是目前基因转导及基因治疗中应用最广泛的递送载体。

赛业生物依据多年病毒包装平台的经验,可以提供不同质量标准的AAV、LV、ADV等病毒。成熟稳定的病毒包装平台,客户多篇文献引用发表,且广泛运用到各种细胞系模型的构建和活体动物的体内研究中。针对AAV病毒包装,采用三质粒共转染的方法和先进的纯化工艺,可提供高纯度、高滴度、不同血清型的AAV包装定制化服务,特别适合动物体内实验,满足基因治疗研究者的个性化选择。
 
赛业生物可提供并不局限于以下AAV包装服务:
 

AAV载体类型

病毒量

病毒滴度

服务周期

纯化过表达AAV小量制备

≥1*10^12 GC

≥1*10^12 GC/mL

快至2周

纯化过表达AAV中量制备

≥5*10^12 GC

≥1*10^13 GC/mL

纯化干扰AAV小量制备(3+1)

≥1*10^12 GC

≥1*10^12 GC/mL

纯化干扰AAV中量制备(3+1)

≥5*10^12 GC

≥1*10^13 GC/mL

纯化敲除AAV小量制备

≥1*10^12 GC

≥1*10^12 GC/mL

纯化敲除AAV中量制备

≥5*10^12 GC

≥1*10^13 GC/mL

注:常规项目赠送对照组病毒
 
赛业生物可提供并不局限于以下AAV血清型:
 

血清型

靶组织

血清型

靶组织

AAV1

肌肉,心脏,神经,骨骼肌

AAV rh10

肝脏、血液、心脏、体外细胞

AAV2

肌肉,肝脏,脑组织,眼,神经

AAV2-retro

神经细胞(逆向非跨突触)

AAV5

肺,眼,神经,胰腺

AAV-DJ

视网膜、肺、肾脏、体外细胞

AAV6

肺,心脏

AAV-DJ-8

肝脏,眼,中枢神经

AAV7

肌肉,肝脏

AAV9-CNS

中枢神经系统

AAV8

肌肉,肝脏,神经,眼

AAV9-PNS

周围神经系统

AAV9

心脏,肌肉,肺,肝脏,神经

更多血清型

欢迎咨询

 

AAV病毒包装服务优势:

  • 周期短:病毒现货交付速度快至2周,定制项目快至5周。
  • 质量可靠:病毒滴度确保≥1*10^12 GC/mL,纯度≥95%,内毒素<10 EU/mL,保证高感染效率。
  • 专业支持:提供从载体设计、病毒包装和使用、体内注射到表型分析的专业技术指导。
  • 经验丰富:十余年病毒包装经验,不断扩充的现货库,多篇客户文献引用发表。
  • AI人工智能加持:强大的人工智能及生信团队,提供AAV载体开发和优化改造服务。
 
AAV病毒包装技术路线:

 
除了AAV病毒载体包装,赛业生物可提供以下LV、ADV病毒包装:
 

病毒载体类型

病毒滴度

周期

慢病毒(LV)

标准规格

≥1*10^8 TU/mL

2-3周

纯化

≥1*10^9 TU/mL

腺病毒(ADV)

标准规格

≥1*10^10 PFU/mL

4-6周

纯化

≥1*10^12 PFU/mL

 
病毒包装常见问题:

Q1:AAV、LV、ADV,三种工具病毒有什么不同?

项目

AAV

ADV

LV

颗粒直径

20-30nm

90-100nm

80-100nm

基因组

4.7kb单链DNA或2.4kb双链DNA

36 kb双链DNA

9.3 kb双链RNA

载体容量

≤4.5kb

8.3kb

≤6kb

表达量

中高水平阶段性表达

高水平瞬时表达

中等水平稳定表达

表达时效性

7-14天开始表达,

1-2天开始表达,

2-4天开始表达,

一般6个月~24个月

持续≤(2-4)周

持续≥6个月

体内扩散能力

一般

免疫原性

极低

中低

整合方式

少量定向整合

不整合

高频随机整合

特点

产量高,组成简单,安全性好

产量高,易纯化

产量较低,稳定表达

适用

动物实验首选

细胞/动物较大基因过表达

细胞实验首选

 

Q2:为什么AAV是目前基因治疗领域最热门的载体?

这是因为AAV具备以下优势:

1. 宿主范围广:分裂和非分裂细胞;

2. 安全性高:未发现致病AAV;ITR和rep/cap独立质粒表达;

3. 免疫原性低:对动物或人体造成的免疫反应小,几种病毒载体中相对最小;

4. 靶向性好:多种血清型,组织特异性。
 

Q3:实现AAV在动物体内表达需要注意哪些关键点?

1. 血清型的选择。AAV的血清型主要由AAV衣壳蛋白的结构所决定,不同的衣壳蛋白结构识别不同的细胞表面受体,因此血清型的选择会影响AAV的感染效率、组织亲和性和开始表达的时间。

2. 启动子的选择,是选择广谱性启动子还是特异性启动子。相比于血清型的组织特异性,特异性启动子可实现细胞的特异性,因此对特异性要求较高的研究,可以选择某种细胞特异性表达的启动子。

3. 注射方式。对于可以进行局部注射的组织器官,采用局部多点注射靶器官可取得较好的特异性和表达效果。

4. 病毒量及滴度。根据不同的靶器官组织和所使用的不同AAV血清型(扩散能力不同),推荐注射的AAV量不同,传递到组织中的病毒颗粒数量对于感染效果影响很大。但AAV使用量并不是越多越好,过多的量可能出现病毒溢出,而且根据我们的经验,病毒量太多有时候甚至会出现表达降低的情况。想了解具体组织的病毒用量可以联系我们咨询。

5. 检测时间。不同基因的表达高峰时间是不同的,再加上AAV需要从单链DNA变成双链DNA,一般在2周可检测到基因表达,如无抗体产生的影响,基因的表达可持续表达半年以上。
 

Q4:AAV注射小鼠,多少病毒量才够呢?

影响AAV注射总量的因素很多,比较重要的有血清型、目标组织类型、注射方式(局部或全身)、动物模型(如大鼠或小鼠)等,对于有文献报道的,可参考文献的注射方法,最好设置几个不同的梯度。例如AAV9感染小鼠心脏组织(心肌细胞),可采用尾静脉注射也可采用心肌多点注射的方式,尾静脉注射推荐1011 vg/mL,100 μL;原点注射则推荐1010 vg/mL,20 μL/点。想了解更多不同组织的AAV注射病毒量的推荐可以联系我们。
 

为了让大家在病毒包装道路上少走弯路,赛业生物制作了《病毒包装问答小百科》,集合了关于慢病毒(LV)、腺相关病毒(AAV)包装常见FAQ,随查随用,可帮助您大量节省实验摸索时间。欢迎点击这里选择【细胞技术服务】下载。

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