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AAV病毒载体设计与开发

赛业生物依据多年病毒包装平台的经验,可以提供不同质量标准的AAV、LV、ADV等病毒,广泛运用到各种细胞系模型的构建和活体动物的体内研究中。针对AAV病毒包装,采用三质粒共转染的方法和先进的纯化工艺,可提供高纯度、高滴度、多种血清型的AAV包装定制化服务,客户多篇文献引用发表,满足基因治疗研究者的个性化选择。

 

服务项目

 

AAV病毒包装服务优势

  • 货期短:病毒现货交付速度快至2周,定制项目快至5周。
  • 质量可靠:滴度高,纯度高,内毒素低,体内感染效率高。
  • 专业服务:提供过表达、干扰、CRISPR技术等AAV载体构建定制方案及专业技术指导。
  • 经验丰富:十余年病毒包装经验,不断扩充的现货库,多篇客户文献引用发表。
  • AI人工智能加持:强大的人工智能及生信团队,提供AAV载体开发和优化改造服务。

 

AAV包装技术路线

 

病毒交付标准

高浓度活性病毒
专业的实验报告
测序峰图
可视化载体图谱
严格的质检报告
详细的操作手册

 

AAV质量检测

赛业生物致力于提供高滴度、高质量的AAV。在质检方面,除了常规qPCR检测AAV滴度以外,还通过其他的质检方式确保AAV的质量,包括有病毒衣壳蛋白纯度检测、病毒基因组大小及纯度检测和病毒生物学活性检测等质检方法。

 

除了滴度检测外,还通过SDS-PAGE 考染检测方法,检测AAV衣壳蛋白的纯度。优质AAV的衣壳VP1、VP2、VP3的浓度比约为1:1:10。通过这项检测,说明AAV的衣壳蛋白纯度高,应具备良好的感染活性。

 

提取AAV病毒基因组,经琼脂糖凝胶电泳检测基因组大小和纯度,判别插入目的片段的大小和有无杂质,确保AAV的质量。通过这个检测,说明包装的AAV插入片段大小无误,且无杂质。

    • AAV感染293T细胞荧光观察(48h)

使用AAV2、AAV8和AAV9,分别以MOI=1E5、1E4、1E3和1E2十二种组合分别侵染293T细胞,通过荧光观察和流式检测,鉴定AAV的感染效率。在荧光强度观察中,AAV2、AAV8和AAV9以MOI=1E5侵染293T细胞,在48h后能观察到强烈的荧光信号。

 

    •  AAV感染293T细胞流式检测

在流式检测中,组合AAV2-MOI=1E3的GFP阳性率达到94.38%,并且其它组也有较高的GFP阳性率,说明AAV具有较高的侵染活性。

 

    • 病毒内生物学活性检测

将AAV2-CMV-Luc、AAV8-CMV-Luc和AAV9-CMV-Luc分别通过尾静脉注射的方式感染小鼠,14天后经过活体检测Luc的荧光强度,3种AAV的Luc的荧光强度较高,说明具有高效的感染能力。

 

 

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