基因敲除细胞株

基于Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统，定制KO细胞服务，可交付单克隆纯合子，快至1个月。我们使用优化的转染体系将RNP（gRNA和Cas蛋白复合物）直接递送到细胞内，相比于质粒和病毒等CRISPR/Cas介导的方法，脱靶效率降低明显，能更精准地切割目标DNA序列。

2024年5月8日-8月31日期间，凡合作过基因编辑大小鼠项目的新老客户，活动期间订购KO细胞株均享优惠折扣，最高可立减8,000元；其中，若基因编辑大小鼠与细胞项目为同一基因，价格低至8,800元。点击订购

Smart-CRISPR™基因编辑平台优势

• 多重工艺保证蛋白敲除

蛋白敲除验证基因库、Smrt-CRISPR™细胞基因编辑系统、罕见病数据中心（RDDC）开发的RNA剪接模型工具等多重工具保障获取WB阴性克隆。

• 快速交付

可交付单克隆纯合子，定制周期快至1月。

• 全新技术升级

Cas蛋白优化升级，可实现高达90%以上切割效率及10kb以上大片段敲除。

• 成熟的技术平台

从体内动物实验到体外细胞实验，拥有18年基因编辑经验，每年构建体内体外模型超万例，已有多篇文献引用发表，可提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型构建及表型分析的全流程服务。

强大的算法赋能细胞的基因编辑项目

• AI辅助筛选Western Blot阴性单克隆

借助罕见病数据中心（RDDC）开发的RNA剪接模型工具，预测碱基序列突变后mRNA序列可能发生的剪切情况，辅助筛选ORF移码的单克隆，更好地规避在Western Blot环节检测出蛋白残留的风险。

应用案例：RDDC分析目标克隆在gRNA位点插入1bp未产生选择性剪切识别位点，产生移码突变和提前终止，Western Blot检测蛋白为阴性，与RDDC预测结果一致。

• Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统辅助方案设计

基于独创的Smart-CRISPR™技术，用户只需在系统中输入需要敲除的基因信息，即可得到自动化生成的方案设计，轻松实现基因敲除、基因敲入等多种策略，编辑效率高达90%。

服务案例

• 鼠永生化胰腺细胞（Immortalized Pancreatic）中CRISPR介导的基因敲除

图1. 构建方式

图2. 对细胞群进行Sanger测序和软件分析，显示Cell Pool有效切割效率为91.5%。

图3. 纯合子单克隆进行Sanger测序，单克隆一条链敲除1bp，另一条链敲除22bp。

图4. 通过Western Blot进行目的基因敲除蛋白表达验证，显示所选克隆中基因表达缺失，蛋白完全敲除。

• 片段敲除案例——人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）中CRISPR介导的基因敲除

图5. 设计一对gRNA靶定基因组上的基因进行全基因缺失，构建方式如图。

图6. gRNA对实现技术优化后，对HK-2细胞的切割效率最大。对细胞群进行Sanger测序，显示两条gRNA有效切割效率分别为86.3%和96.2%。

图7. 配对的gRNAs共转染到HK-2细胞中，并筛选单克隆，对纯合子单克隆进行Sanger测序，单克隆一条链敲除11323bp，另一条链敲除11325bp。

基因敲除细胞株应用案例

• 体外敲除HIF-1α基因以验证其调控机制

Di-(2-ethylhexyl) phthalate exposure leads to ferroptosis via the HIF-1α/HO-1 signaling pathway in mouse testes.

研究人员构建了HIF-1α基因敲除的Leydig和Sertoli细胞系，通过Sanger测序和Western blotting检测，确认了敲除细胞系中的HIF-1α被成功敲除。与野生型细胞相比，HIF-1α-KO细胞系在MEHP刺激下细胞活力受损的程度有明显改善。同时，脂质过氧化和亚铁超载也受到抑制。分别使用qPCR和Western印迹法评估Hmox1和HO-1水平的表达，发现敲除Hif-1α能逆转MEHP刺激下的Hmox1和HO-1表达水平上调。此外，MEHP刺激后ROS爆发和细胞死亡程度也在敲除HIF-1α后减弱。Western印迹显示敲除HIF-1α恢复了ACSL4、FTH1和SLC7A11的表达，以及抑制GPX4的表达。由此表明，MEHP刺激以HIF-1α依赖的方式导致睾丸Leydig和Sertoli细胞的铁死亡。点击查看文献解读