在我们验证基因敲除(KO)细胞株是否建立成功时,除了采用常规的PCR、测序等方法外,蛋白水平的Western blot验证也是一个重要的方法,特别是对于文章发表中结果的呈现,Western blot图尤为重要。

但在实际情况中,偶尔也会出现测序鉴定为KO纯合子但WB检测却有条带的现象,即蛋白残留。出现这一情况的原因很复杂,跟gRNA的设计、基因(或mRNA)的可变剪切、WB抗体的选择等因素都密切相关。 点击了解详情

蛋白检测方法Western blot,是依靠抗原抗体的特异性结合实现的,对于常规蛋白的特异性结合,并不是识别整个目的蛋白,而是识别并结合目的蛋白的某一段氨基酸序列或某一部分功能结构域。因此,我们从商业公司所购买的抗体,若其与目的蛋白结合位置处于敲除位点的前端,便可能会出现抗体与N端残留的蛋白结合,导致WB检测条带的出现,即使此蛋白的功能可能已经丧失。

再例如,可变剪切指当某个外显子被破坏或缺失时,其转录的mRNA前体通过不同的剪接方式产生不同的mRNA剪接异构体的过程,是调节基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制。当敲除位点处外显子被切割后,包含在内含子中的RNA剪接规则同时被破坏,在一定情况下,缺失的外显子序列在RNA剪切阶段被略过,直接将其上游的外显子与下游的外显子相连,形成一种全新的mRNA,从而继续蛋白质的翻译。

由外显子的可变剪切引起的蛋白残留是最为复杂的,其影响因素有很多,包括细胞系的类型,目的基因和细胞的培养环境等。

因此,在深入分析了你的基因、细胞信息及敲除方案之前,谁都无法判断、也无法保证你要构建的KO细胞是否会发生蛋白残留。

伟人说得好:没有调查研究,就没有发言权。
本着科学严谨的态度,盲目追求蛋白水平的guarantee是不理智的。
虽然蛋白残留问题不常发生,但一旦发生就让人抓狂。
KO细胞蛋白残留,似乎成了个玄学问题?
想要知道盲盒里面是什么,最简单直接的办法就是打开它。

赛业生物自主开发细胞基因编辑系统Smart-CRISPR™,是基于人工智能技术所建立的综合算法,通过最优的gRNA设计,结合抗体分析,及阶段性WB测试等策略,为您提供科学的解决方案,让您不再为KO细胞蛋白残留问题而发愁。

想您所想,解您所忧!成功案例细胞株低至1.66万,欢迎拨打 400-680-8038点击侧边栏在线咨询 或邮件至 info@cyagen.com 咨询订购。

活动时间:2021年5月15日——2021年6月30日

活动内容:活动期间,凡订购基因敲除细胞株服务的客户享活动优惠价,且有多种特价细胞供您选择。

基因敲除服务类型 交付成果 促销价(元/项目)
成功案例细胞株 特价细胞 单克隆纯合子 1.66万
其他细胞 单克隆纯合子 1.98万
备注 新增多种特价细胞:HEK-293、Hela、HCT-116、MDA-MB-231、A549、HK-2、RAW264.7、NCI-H1299、CHO-K1、Vero、U251和C6
服务优势
独创Smart-CRISPR™技术
独创Smart-CRISPR™技术:
全新升级的细胞基因编辑系统Smart-CRISPR™,轻松实现移码突变、片段敲除等多种敲除策略,为您提供科学的解决方案,让您不再为KO细胞蛋白残留问题而发愁,并确保项目8-12周完成。
成熟的基因编辑平台
成熟的基因编辑平台:
超千例成功项目,超200种细胞株成功构建经验,多篇相关文献引用发表,可提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠移植瘤模型建立及瘤组织分析的全套服务。
规模庞大、品种齐全的科研细胞库
规模庞大、品种齐全的科研细胞库:
建立有各项参数明确、性能稳定的科研细胞库;基于多年经验总结的Antibiotic-Free培养工艺,确保交付细胞100%无污染。
专业的项目管理
专业的项目管理:
24h内出方案,定期反馈项目进展,博士团队技术支持,详尽的交付报告,并可根据要求提供不同克隆(纯合子、杂合子+阴性克隆)细胞的交付。
细胞敲除服务流程
细胞敲除服务流程
成功基因编辑细胞类型精选
分类 细胞名称 缩写
血液和淋巴系统 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW 264.7
人B淋巴母细胞 HMy2.CIR
人T淋巴细胞白血病细胞 HuT 78
人单核细胞白血病 THP-1
人慢性髓系白血病细胞 K-562
人原髓细胞白血病细胞 HL-60
人白血病T淋巴细胞 Jurkat, Clone E6-1
骨骼、皮肤系统 小鼠黑色素瘤细胞 B16
小鼠皮肤黑色素瘤细胞 B16-F10
人骨肉瘤细胞 U-2 OS
人恶性黑色素瘤细胞 A375
人纤维肉瘤细胞 HT-1080
消化系统 小鼠结肠癌细胞 CT26.WT
人回盲肠癌细胞 HCT-8
人结肠癌细胞 HCT 116
HT-29
人结肠腺癌细胞 SW480
人结直肠癌细胞 LoVo
人食管鳞癌细胞 KYSE-150
人胃癌细胞 HGC-27
呼吸系统 小鼠肺癌细胞 LLC
仓鼠肺细胞 V79
人正常肺上皮细胞 BEAS-2B
人大细胞肺癌细胞 NCI-H460
人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1299
A549
人肺鳞癌细胞 SK-MES-1
NCI-H520
泌尿系统 小鼠肾小球系膜细胞 SV40 MES 13
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 PC-12
大鼠肾细胞 NRK
非洲绿猴肾细胞 Vero
恒河猴肾细胞 LLC-MK2
人膀胱癌细胞 5637
人前列腺癌细胞 PC-3
人胚肾细胞 293 Cells, low passage
人肾细胞腺癌细胞 786-O
ACHN
脑和神经系统 小鼠垂体瘤细胞 AtT-20
大鼠胶质瘤细胞 C6
人胶质瘤细胞 U251
人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH
内分泌系统 小鼠乳腺癌细胞 4T1
人乳腺癌细胞 MCF-7
MDA-MB-231
生殖系统 仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1
人宫颈癌细胞 Hela
人卵巢癌细胞 SK-OV-3
循环系统 小鼠成肌细胞 C2C12
大鼠成肌细胞 L6
大鼠心肌细胞 H9c2(2-1)
客户引用文献5240篇,IF合计20854,被引用25043次
CD73 on cancer-associated fibroblasts enhanced by the A2B-mediated feedforward circuit enforces an immune checkpoint.
Nature Communications (2020)
Maternal paraben exposure triggers childhood overweight development.
Nature Communications (2020)
Selective deletion of endothelial cell calpain in mice reduces diabetic cardiomyopathy by improving angiogenesis.
Diabetologia. (2020)
TREM2 promotes Aβ phagocytosis by upregulating C/EBPα-dependent CD36 expression in microglia.
Scientific Reports. (2020)