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赛业生物可提供慢病毒(LV)、腺相关病毒(AAV)、腺病毒(ADV)包装服务,从病毒滴度、纯度、活性各方面确保病毒包装质量的可靠性,广泛应用到各种细胞模型的构建、活体动物的体内注射、基因治疗研究等领域,且被多篇文献引用报道,助推实验顺利开展。

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● 活动时间:2021年12月1日——2021年12月31日

● 活动对象:科研终端客户

慢病毒包装拼单享优惠,多项目拼单低至4200元!
优惠一重奏
病毒类型 规格 原价(元) 1个项目(元) ≥3个项目(元) 点击订购
过表达慢病毒 ≥108 TU 6200 4800 4200 订购
干扰(3+1)慢病毒 ≥108 TU 8800 6800 6200 订购
服务优势

✔ 采用第三代包装系统,病毒滴度高、细胞毒性小、无污染;

✔ 种类丰富的载体库和基因库,可操作编码基因和各种非编码基因,解决客户定制化需求;

✔ 成熟稳定的病毒包装平台,客户多篇引用文献发表;

✔ 提供从慢病毒包装、细胞模型构建、表型检测、机制初步探讨的整体服务;

✔ 详尽的交付:高活性病毒、专业的实验报告、严格的质检报告、详尽的操作手册,专业省心。

案例展示

慢病毒感染效果案例展示

HepG2
A549
HT1080
THP-1
Ploy
人脐带间充质干细胞

更多LV感染效果请联系我们咨询。

稳转细胞株惊爆优惠,最高直降7800元!
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稳转株项目类型 原价(元) 常规细胞活动价(元) 特价细胞活动价(元) 点击订购
过表达稳转株 15200 12000 10800 订购
干扰(3+1)稳转株 24600 18800 16800 订购

新增多种特价细胞:HEK-293、Hela、HCT-116、RAW264.7、HGC-27、MFC、BEAS-2B、PANC02 等多种细胞,欢迎联系咨询。

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在做病毒包装相关实验时,你是否还在犹豫哪个工具病毒更适合我的实验?如何才能提高病毒感染效率?在构建细胞模型的过程中,您是否纠结如何选择最优策略?以下两本工具书,集合常见病毒包装及基因编辑细胞系常见FAQ,随查随用,可帮助您大量节省实验摸索时间,欢迎点击下载。

基因编辑细胞系常见问题解答

版本:2021.10
 

病毒包装问答小百科

版本:2021.09
 

慢病毒包装问题精选

  • 为何我的LV包装出毒量很低?

    为什么都是采用同样的慢病毒包装系统,别人次次成功,我的不是滴度低就是稳定性差?这是因为除了包装系统本身,LV的包装还与下列几个因素密切相关:

    (1)细胞状态:LV的包装一般使用293T细胞,293T细胞的活力、生长状态,是否处于对数生长期、铺板是否均匀等对病毒的产量影响很大,并控制转染前密度为50~60%。

    (2)目的基因:目的基因的大小、序列及翻译的蛋白是否含有毒性均会影响包装效果;例如,若目的片段较大(>2.5k),则可能会导致包装滴度下降,甚至无法包装。某些过表达会产生细胞毒性的蛋白,可能会导致细胞异常从而出毒量低(可考虑更换为腺病毒)。

    (3)质粒质量:做好阴性对照(GFP组),确保包装目的基因的载体构建的完整性,并做好纯化。

    (4)收毒时机:转染后24、48h观察细胞生长状态及荧光状态,生长状态良好一般于48h第一次收集病毒上清,换液后于72h再次收集病毒上清。

  • 包装出来的LV感染细胞效率低?

    理论上LV感染细胞的能力很强,而且能感染分裂和非分裂期的细胞,但为什么我的感染效果总是不理想?影响LV感染效果的因素有哪些?

    (1)细胞类型:有些细胞本身就较难被感染,如某些原代细胞,可考虑加大病毒量或采用浓缩病毒进行感染。

    (2)细胞生长状态:感染细胞前,需要保证细胞处于良好的生长状态,以及合适的生长密度,细胞膜的流动性、与细胞表面的接触面积及表面受体的表达丰富等均会影响病毒感染细胞的效果;另外对于悬浮细胞,可以采用离心感染的方法。

    (3)病毒质量:包装出来的LV应尽量避免冻融,反复冻融会降低病毒的滴度(每次约降低10%),若一次用不完建议分装后储存于-80℃,但即使-80℃也不建议超过6个月;对于4℃保存的LV则尽量3天内用完。

    另外,也可考虑加入Polybrene助感染试剂增强感染效果,但Polybrene本身具有细胞毒性,谨慎使用。

  • 为什么我用LV做基因的干扰表达效果不好?

    对于干扰慢病毒,提高病毒量对干扰效果一般不会有改善效果。干扰效果差一般来说是由以下几个原因导致的: 

    (1)shRNA的特异性:shRNA设计而导致的脱靶效应,重新设计shRNA。 

    (2)干扰机制:促进mRNA降解还是抑制翻译? 

    (3)细胞反馈机制:某些基因表达水平降低会导致核糖体翻译效率上升,表达水平上升。 

    (4)结果判读建议以蛋白为准。

  • 怎么确认我的细胞需要多少病毒量才够?那么多规格我该怎么选?

    由于慢病毒的感染谱很广,可以感染分裂期和非分裂期的细胞,对于大部分的细胞类型,采用1×108 TU/ml的规格即可满足要求,另外由于目前慢病毒多用于体外细胞的感染而少用于体内注射,因此非纯化亦可。

    对于难感染的细胞,如原代细胞,需要较高的MOI,需要的病毒量也较多,建议选高规格,如1×109 TU/ml病毒。

    对于较为少见的细胞类型所需要的病毒量,可通过参考文献或预实验确定。

成功基因编辑细胞类型精选
分类 细胞名称 缩写
血液和淋巴系统 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW 264.7
人B淋巴母细胞 HMy2.CIR
人T淋巴细胞白血病细胞 HuT 78
人单核细胞白血病 THP-1
人慢性髓系白血病细胞 K-562
人原髓细胞白血病细胞 HL-60
人白血病T淋巴细胞 Jurkat, Clone E6-1
骨骼、皮肤系统 小鼠黑色素瘤细胞 B16
小鼠皮肤黑色素瘤细胞 B16-F10
人骨肉瘤细胞 U-2 OS
人恶性黑色素瘤细胞 A375
人纤维肉瘤细胞 HT-1080
消化系统 小鼠结肠癌细胞 CT26.WT
人回盲肠癌细胞 HCT-8
人结肠癌细胞 HCT 116
HT-29
人结肠腺癌细胞 SW480
人结直肠癌细胞 LoVo
人食管鳞癌细胞 KYSE-150
人胃癌细胞 HGC-27
呼吸系统 小鼠肺癌细胞 LLC
仓鼠肺细胞 V79
人正常肺上皮细胞 BEAS-2B
人大细胞肺癌细胞 NCI-H460
人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1299
A549
人肺鳞癌细胞 SK-MES-1
NCI-H520
分类 细胞名称 缩写
泌尿系统 小鼠肾小球系膜细胞 SV40 MES 13
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 PC-12
大鼠肾细胞 NRK
非洲绿猴肾细胞 Vero
恒河猴肾细胞 LLC-MK2
人膀胱癌细胞 5637
人前列腺癌细胞 PC-3
人胚肾细胞 293 Cells, low passage
人肾细胞腺癌细胞 786-O
ACHN
脑和神经系统 小鼠垂体瘤细胞 AtT-20
大鼠胶质瘤细胞 C6
人胶质瘤细胞 U251
人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH
内分泌系统 小鼠乳腺癌细胞 4T1
人乳腺癌细胞 MCF-7
MDA-MB-231
生殖系统 仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1
人宫颈癌细胞 Hela
人卵巢癌细胞 SK-OV-3
循环系统 小鼠成肌细胞 C2C12
大鼠成肌细胞 L6
大鼠心肌细胞 H9c2(2-1)