Leukemia文章揭示NEDD9在淋巴细胞白血病中的作用

Eµ-TCL1小鼠模型被广泛用于慢性淋巴细胞白血病的研究。基于Eµ-TCL1模型，研究人员构建了TCL1（TCL1^tg/wtNedd9^wt/wt）和TCL1-N（TCL1^tg/wtNedd9^−/−）小鼠，以分析组成型的Nedd9敲除对CLL发病机制的影响。有趣的是，与TCL1组相比，TCL1-N组的总生存期大大延长。这种生存差异反映了Nedd9的缺失显著延迟了CLL发作。

同时，免疫组化染色结果显示，CD45R⁺B细胞严重浸润TCL1小鼠的脾脏和骨髓，但TCL1-N小鼠中的浸润却很有限。由此可见，TCL1-N小鼠骨髓和脾脏中的CLL浸润与TCL1小鼠相比明显减少。这些结果表明，Nedd9的缺失显著延迟了CLL的发作和进展，特别是破坏了CLL细胞在淋巴器官中的浸润，使小鼠获得了明显的生存优势。

为了研究B细胞特异性的Nedd9缺失是否影响CLL发病机制，研究人员委托赛业生物构建了一个Nedd9条件性敲除小鼠模型，其中Nedd9仅在B细胞谱系中缺失（图1）。他们将该基因型小鼠与TCL1小鼠杂交，生成了B细胞缺失Nedd9的TC-N（TCL1^tg/wtCD19Cre^tg/wtNedd9^flfl）小鼠和作为对照的TC（TCL1^tg/wtCD19Cre^wt/wtNedd9^flfl）小鼠。与TC小鼠相比，TC-N小鼠的CLL发病显著延迟，CLL细胞向骨髓和脾脏的浸润也减少。第二个独立的小鼠模型再次证实了Nedd9在CLL发病机制中的作用，并强调了B细胞内在的Nedd9活性是这种影响的主要贡献者。

图1 B细胞特异性的Nedd9缺失可降低小鼠的CLL疾病负荷

接下来，研究人员深入探索了其中的机制。多个实验的结果并未显示NEDD9对B细胞增殖、凋亡或BCR信号通路有重大影响。那么，Nedd9缺失是否会改变CLL细胞归巢？他们对TCL1和TCL1-N CLL细胞开展了短期归巢分析。

他们将CFSE标记的CLL细胞注射到受体小鼠内，3小时后收集器官进行浸润分析。与TCL1细胞相比，TCL1-N CLL细胞较少浸润到受体的脾脏中，不过骨髓浸润没有差异。免疫缺陷型NSG小鼠的结果也类似。这些数据表明，Nedd9促使CLL细胞有效归巢至淋巴组织，这是导致CLL进展的重要机制。

细胞粘附和迁移是淋巴细胞归巢中的基本过程，于是他们开展了细胞粘附分析。TCL1-N CLL细胞完全无法粘附到纤连蛋白（CLL归巢中的主要粘附分子），对BMSC的粘附也显著受损。此外，Nedd9的缺失导致CLL细胞迁移明显减少。因此，研究人员认为，NEDD9的缺失主要是通过破坏CLL细胞粘附和迁移而影响其归巢。

研究人员从CLL患者和健康对照的外周血中分离出B细胞，并检测了磷酸化NEDD9和总NEDD9的表达水平。分析结果表明，NEDD9在CLL细胞中持续激活，对细胞刺激（如BCR激活）的反应丧失（图2）。基因关联分析表明，NEDD9 mRNA在外周血CLL细胞中的表达与粘附和迁移信号通路高度相关，而且人类CLL淋巴结经常高水平表达NEDD9，部分患者的NEDD9表达在CLL增殖中心富集。同时，NEDD9水平还与白细胞计数之间存在强的正相关，而白细胞计数正是CLL侵袭性的标志。这些结果都提示了NEDD9在CLL发病机制中的功能性作用。

图2 NEDD9表达与CLL细胞的粘附和迁移特征相关

他们进一步推测，在Nedd9敲除细胞中，CXCL12的趋化性受损是细胞内的信号转导网络出现缺陷的结果。目前已知NEDD9能够共激活AURKA/HDAC6信号轴，诱导细胞骨架变化。于是他们分析了AURKA抑制剂和HDAC抑制剂是否能够阻断CLL细胞迁移。他们发现，两种抑制剂都能显著降低CLL细胞的迁移和趋化性。这些数据表明，靶向NEDD9相关通路（如AURKA-HDAC6-CTTN信号通路）是一种有潜力的策略，可预防CLL归巢，从而限制疾病进展。

总的来说，这项研究提供了强有力的证据，说明NEDD9在CLL发病机制中发挥功能性作用。这些结果可以加深人们对CLL归巢机制的了解，也有望为CLL患者设计其他的治疗方法，以阻止CLL细胞迁移和疾病进展。

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Nedd9条件性基因敲除小鼠

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