IF:38.63，MAMDC2介导的小胶质细胞先天性抗病毒免疫与阿尔茨海默症相关——暨南大学王一飞教授团队新发现

研究主要使用了Mamdc2^-/-基因敲除小鼠（C57BL/6J背景）（由赛业生物提供）、过表达Mamdc2小鼠（Balb/c背景）（由广东省医学动物实验中心提供）、慢病毒稳定细胞系（由赛业生物提供）、BV2细胞、HMC3细胞、HEK 293T细胞等。

该研究运用了单细胞转录组测序、慢病毒稳转细胞系构建、双荧光报告酶基因检测、免疫共沉淀、小胶质细胞分离、qPCR、免疫荧光染色、激光共聚焦成像等多种技术方法。

该研究通过分析AD小鼠小胶质细胞的单细胞转录组数据，筛选出AD小鼠和HSV-1感染小鼠小胶质细胞中均高表达的基因Mamdc2。该基因在不同周龄的AD模型鼠均高表达，提示MAMDC2在两种疾病模型下可能均具有重要作用。通过CRISPR-Cas技术（由赛业生物提供）获得Mamdc2缺陷型（Mamdc2^−/−）小鼠，实验发现Mamdc2^−/−小鼠更易受HSV-1感染，在过表达Mamdc小鼠感染HSV-1实验中，发现该小鼠病毒拷贝数降低、HSE相关症状减弱（图1）。

图1 Mamdc2^−/−小鼠和Mamdc2过表达小鼠感染HSV-1的表型

该研究结果显示Mamdc2^−/−小鼠感染HSV-1时Ⅰ型干扰素(I-IFN)的表达量显著下降，在HSV-1感染BV2细胞实验中，敲低Mamdc2组的I-IFN的表达量同样显著下降，而在过表达Mamdc2组的细胞中I-IFN的表达量却上调（图2）。

图2 MAMDC2在体外和体内积极调节小胶质细胞的先天性抗病毒免疫反应

接下来，研究人员想探究Mamdc2调控了哪些因子的激活可以增强Ifnb1的启动子活性。通过双荧光报告酶基因检测结果可以看出，Mamdc2的过表达可以增加cGAS+STING和TBK1对荧光报告酶的活性，并且在Mamdc2缺失细胞中，STING的天然配体cGAMP对Ifnb1和ISGs的诱导显著减弱。这些结果表明MAMDC2可能通过STING来调控先天性抗病毒免疫反应（图3）。

图3 MAMDC2通过STING发挥免疫作用

为了详细研究MAMDC2与STING的相互作用，研究人员根据4个MAM结构域生成了一系列表达FLAG标记的MAMDC2结构域质粒，Co-IP结果发现MAM-1是MAMDC2与STING结合的必要条件（图4）。

图4 MAM-1结构域介导MAMDC2和STING相互作用

简而言之，该研究报道了Mamdc2正向调节小胶质细胞对嗜神经病毒的先天性抗病毒免疫反应，为研究嗜神经疱疹病毒感染时小胶质细胞I-IFN反应的调节机制提供了新的见解，阐明了Mamdc2调控小胶质细胞的先天性抗病毒免疫反应的机制，并为全面解析AD和HSV-1之间的作用机制提供新的思路和新的理论依据。

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