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「CAR-T研究平台」治好了我的精神内耗

当前嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy, CAR-T)已经在血液肿瘤治疗领域取得了瞩目的效果。但与小分子或抗体药物不同的是,CAR-T是一种“活的”细胞类药物,有诸多因素可以影响疗效,其中CAR分子结构便是一关键因素。

 

CAR分子结构包含识别肿瘤抗原的抗体单链可变区、铰链区,以及胞内的共刺激结构域、信号传导域,其设计的合理性会影响CAR-T细胞的杀伤效应、体内持久性、以及安全性等。因此,针对不同的肿瘤治疗靶点,我们需要设计合理有效的CAR分子,并包装成CAR慢病毒,用于后续CAR-T细胞的构建。

CAR-T研究平台

CAR分子设计太难?

慢病毒包装效果不好?

怎么摆脱实验带来的精神内耗?

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所有难题轻松搞定!

不信来看看几个实验案例吧

 

CD19抗原慢病毒包装及滴度检测

将表达CD19抗原的慢病毒纯化液进行梯度稀释(0.01、0.1、1、10μl),分别加入到相同数量的293T细胞中,72小时后流式检测293T细胞阳性率,进而按如下公式计算慢病毒的转导滴度:

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A:表示0.1μl组阳性细胞占比

B:表示0.01μl组阳性细胞占比

N:加入病毒时候细胞数量

V:表示A组中病毒的加入体积

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图1 CD19抗原慢病毒滴度检测结果

(数据来源:赛业生物)

 

如图所示,CD19抗原阳性细胞的数量随转染病毒梯度的增加而逐渐升高,表明该慢病毒有良好的感染活性,并按上述公式计算病毒滴度为:1.4×10Tu/ml。

 

CD19-293T稳转细胞株构建

我们将成功制备的上述CD19病毒转染293T细胞,经过多轮筛选获得阳性率几乎为100%的CD19-293T细胞,其阳性率检测结果如下图所示。

 

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图2 CD19-293T稳转细胞株阳性率检测结果

(数据来源:赛业生物)

 

CD19-CAR慢病毒包装及滴度检测

我们将针对CD19靶点设计的二代经典CAR分子构建到慢病毒载体中,并包装得到CD19-CAR慢病毒,采用上述方法检测病毒滴度,经计算后得到病毒滴度为:4.33×108 Tu/ml。

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图3 CD19 CAR分子结构,其中VH和VL序列来源于CD19抗体FMC63克隆

 

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图4 CD19 CAR慢病毒滴度检测结果

(数据来源:赛业生物)

 

其他慢病毒感染

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图5 其他细胞慢病毒感染效果图

 

CAR-T细胞治疗实用指

 

免疫细胞培养难?

T细胞感染效果差?

细胞鉴定缺乏条件?

 

在实际科研场景下,往往会面临着诸多困境,不如让我们来为你的项目出谋划策。扫码免费领取「细胞治疗完整解决方案」,即可一键获取干货!

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