「CAR-T研究平台」治好了我的精神内耗

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将表达CD19抗原的慢病毒纯化液进行梯度稀释（0.01、0.1、1、10μl），分别加入到相同数量的293T细胞中，72小时后流式检测293T细胞阳性率，进而按如下公式计算慢病毒的转导滴度：

A：表示0.1μl组阳性细胞占比

B：表示0.01μl组阳性细胞占比

N：加入病毒时候细胞数量

V：表示A组中病毒的加入体积

图1 CD19抗原慢病毒滴度检测结果

（数据来源：赛业生物）

如图所示，CD19抗原阳性细胞的数量随转染病毒梯度的增加而逐渐升高，表明该慢病毒有良好的感染活性，并按上述公式计算病毒滴度为：1.4×10⁸ Tu/ml。

我们将成功制备的上述CD19病毒转染293T细胞，经过多轮筛选获得阳性率几乎为100%的CD19-293T细胞，其阳性率检测结果如下图所示。

图2 CD19-293T稳转细胞株阳性率检测结果

（数据来源：赛业生物）

我们将针对CD19靶点设计的二代经典CAR分子构建到慢病毒载体中，并包装得到CD19-CAR慢病毒，采用上述方法检测病毒滴度，经计算后得到病毒滴度为：4.33×10⁸ Tu/ml。

图3 CD19 CAR分子结构，其中VH和VL序列来源于CD19抗体FMC63克隆

图4 CD19 CAR慢病毒滴度检测结果

（数据来源：赛业生物）

图5 其他细胞慢病毒感染效果图