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Cre-LoxP系统工作原理

条件性基因打靶是将某个基因的修饰限定于某些特定类型的细胞或小鼠发育的某一特定阶段的一种特殊的基因打靶方法。目前条件性基因打靶主要使用来源于大肠杆菌P1噬菌体的Cre-LoxP系统,利用Cre-LoxP系统能够实现目的基因的定点敲入、敲除、重组酶介导的盒式交换等多种基因工程操作。

 

Cre-LoxP系统工作原理

 

Cre蛋白是一种存在大肠杆菌噬菌体P1的重组酶,它可以特异性识别细胞内基因或DNA上的LoxP序列并根据LoxP序列的位置和LoxP序列之间的关系,介导不同的特异性重组反应。

 

条件性基因敲除的基本原理利用的重组方式是:当两个LoxP位点位于一条DNA链上且方向相同Cre重组酶能有效地敲除两个LoxP位点间的序列(图A)

 

基因敲除

图为Cre-loxP诱导基因重组的方式,敲除(A)、翻转(B)、易位(C)

 

制备条件性基因敲除小鼠需要Floxed小鼠(即目的基因被LoxP序列锚定的小鼠)和Cre鼠两种小鼠。Cre小鼠即Cre重组酶在小鼠体内特定组织或细胞表达的小鼠,其Cre 基因的表达受控于一个特异性启动子,该启动子决定了Cre表达的组织或细胞类型。如果同时将 Cre基因置于配体或药物可诱导的启动子控制下, 就可同时实现在时间和空间水平上对 Cre表达的精确调控。

 

赛业生物Cre工具鼠平台

研究人员在开发条件性基因敲除(cKO)或条件性基因敲入(cKI)大鼠模型时面临的主要问题是缺乏针对目标靶标的Cre品系。鉴于与大鼠相关的设施费用较高,因此创建任意品系的Cre-lox大鼠都有可能很快面临成本或空间的限制。为了解决这个问题,赛业生物正在着手建立一个Cre模型库,其中包含各种大小鼠品系,以供全球研究人员使用。

 

基因敲除

 

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关于赛业

赛业生物历经14年发展,已服务全球数万名科学家,产品和技术已直接应用于包括CNS(Cell,Nature, Science)三大期刊在内的4000余篇学术论文。除了提供基因敲除基因敲入条件性基因敲除模型定制服务外,赛业生物还有专业的手术疾病模型团队,可以提供多种复杂精细的小动物手术疾病模型;药物筛选评价小鼠平台可以提供从欧美行业领袖引进的免疫缺陷鼠、用于心血管及阿尔茨海默症等研究的人源化小鼠;国际标准化无菌鼠技术平台可以提供无菌鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等基于无菌动物模型的各类产品和服务,结合赛业生物成熟稳定的基因编辑小鼠平台,还可帮助您研究菌群与基因的互作机制。

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