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《鼠年说鼠》第九期:各种类型的基因编辑鼠如何建系?


    

《鼠年说鼠》系列文章,每周二更新,专门解答大小鼠铲屎官们在养鼠过程中经常遇到的繁育与鉴定类的问题,同时向大家征集问题,任何基因编辑鼠饲养繁殖或鉴定的困惑统统可以丢给小赛,小赛会给您回复或统一在后面的内容为大家做出详细的解答。今天我们就开始第九期的内容吧~

 

《鼠年说鼠》第九期:各种类型的基因编辑鼠如何建系?

 

完全性基因敲除、基因敲入(点突变)鼠如何建系?

完全性基因敲除、基因敲入(点突变)鼠如何建系?

 

区别:

1. 转基因

转基因项目具有插入位点及拷贝数不确定的特点,获得的F0代鼠可能各不相同,F0代不能相互交配。需要将F0与野生型多传几代,待基因型稳定后通过其他实验手段筛选出优先传代的品系继续繁殖。

 

2. CRISPR/Cas9技术构建的完全性基因敲除、基因敲入(点突变)鼠

CRISPR/Cas9技术构建的F0代阳性鼠由于切割效率和非同源修复可能会出现不同的line,需要与野生型鼠交配获得稳定基因型的F1代阳性鼠。不同line的后代同样不建议相互交配。

 

条件性敲除(敲入)鼠如何建系?

 

F0代与野生鼠互配获得F1代杂合子,F1代杂合子(flox/+)互配得到F2代纯合子(flox/flox),F2代纯合子(flox/flox)与全身/组织特异性工具鼠交配获得F3代(flox/+, Cre),F3代(flox/+, Cre)互配得到F4代(flox/flox, Cre),即cKO/cKI纯合子。

 

条件性的项目需要与全身/组织特异性工具鼠交配达到目的,所以在繁殖过程中可根据全身/组织特异性工具鼠自身的特点安排繁殖。

条件性敲除(敲入)鼠如何建系?

 

备注:

1. 如果是通过打靶构建的全身/组织特异性工具鼠,要注意选择与目的基因不在同一条染色体上,以免繁殖不到cKO/cKI纯合子。

2. 有生殖细胞泄露风险的Cre工具鼠,繁殖时按照建议性别选择不同基因型鼠。

3. 诱导型的Cre工具鼠,需要加药后才能实现特异组织删除。

4. F1代若有剩余的flox杂合鼠(flox/+),或想要加快获得目标鼠,第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠,可缩短一代周期。

即使是组织特异性工具鼠,也可能在其他组织有泄露表达的风险。

 

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往期回顾

1. 大小鼠的繁殖生理

2. 如何判断大小鼠性别及是否怀孕?

3. 如何护理妊娠期与哺乳期的大小鼠?

4. 大小鼠的繁育应注意哪些问题以实现优生优育?

5. 大小鼠不孕或者后代出生状况差怎么办?

6. 小鼠吃仔怎么办?

7. 如何避免小鼠打架?

8. 小鼠脱毛了怎么办?

如何提取组织DNA模板?

 

关于赛业

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