课程回顾丨乳腺癌动物模型构建及应用案例

4月17日，肿瘤药效部研发科学家朱金娥为大家主讲「乳腺癌动物模型构建及应用案例」线上课程，以下为本次直播常见问题汇总与解答。

FAQ:

1.McF-7细胞系的免疫缺陷小鼠模型构建？

2.如何成功建立原位成瘤小鼠模型？

3.雌激素包埋流程及注意事项？

4.BT-474皮下接种的数据参考？

5.颈动脉注射的注射体积和细胞量推荐是多少？

Q McF-7细胞系的免疫缺陷小鼠模型构建？

A

McF-7是ER⁺的乳腺癌细胞，构建模型时需要添加雌激素药片，细胞接种时需要添加基质胶，该模型体内生长周期一般在7~8周，肿瘤体积达到2000mm³实验终点。雌激素药片最好选择缓释60天以上的。体内接种对于细胞活率和活性状态要求较高，细胞活率在90%以上，最好添加基质胶。该模型对于宿主依赖性较高，免疫缺陷程度越高，构建模型的细胞条件会有所下降。赛业NKG小鼠是高度免疫缺陷小鼠，McF-7是ER⁺的乳腺癌细胞在NKG上构建的模型，可以降低细胞接种量5M/mouse，在裸鼠上构建模型推荐用10M/mouse。

Q 如何成功建立原位成瘤小鼠模型？

有3点影响因素：

1、细胞活性，构建原位一般使用luc过表达的阳性细胞株。细胞培养条件，细胞接种的活率，细胞自身荧光表达能力都会影响原位成瘤；

2、宿主小鼠，原位模型对于小鼠品系依赖较大，根据实验需求，是使用免疫缺陷小鼠还是使用免疫重建小鼠亦或者选择免疫健全小鼠。小鼠品系也是影响原位模型构建的一大因素；

3、手术因素，原位模型（除去乳垫原位接种）一般都需要进行麻醉后接种到原位进行模型构建。麻醉和手术的因素会影响到小鼠存活。

小鼠麻醉，一般雌激素包埋在小鼠的左侧肩胛骨皮下，包埋的入口是在小鼠左侧靠后肢处。皮肤剪开一个可以容纳雌激素药片的口子，用直镊将雌激素夹紧，递送到左侧肩胛骨皮下。

Q BT-474皮下接种的数据参考？

将细胞以乳垫注射的形式接种到8周的C-NKG和NOD/scid小鼠体内，并在不同的时间点测量成瘤体积。细胞接种前一天，在左侧皮下接种新型雌激素药片，细胞接种量为5×10⁶/只和1×10⁷/只，数据以Mean±SEM形式呈现。结果显示BT-474在C-NKG和NOD/scid容易成瘤。肿瘤体积预计在接种后8天达到100-200mm³,在接种后50天达到1500mm³实验终点，给药窗口期预计在42天左右。

Q 颈动脉注射的注射体积和细胞量推荐是多少？

A

颈动脉注射方法：麻醉小鼠，分离一测颈动脉，缝合线预备3个结，先将颈外动脉缝合结打好，开始注射，注射结束后，迅速将颈总动脉近心端的结打死，再打远心端的缝合结。一般推荐40ul/mouse。