影响rAAV实现体内基因操作实验结果的关键——实验操作对注射效果有重要影响

为了实现目的基因在特定的组织中高效表达，需要前期做好实验规划。其中最为关键的是需要选择合适的血清型和启动子。由于rAAV的吸附，入侵，胞内运输，蛋白酶体降解，入核，脱衣壳等步骤都与衣壳蛋白相关，因此血清型的结构决定rAAV的侵染效率和靶向特异性等基本能力。我们可以根据实验需求选择合适的血清型。下表是由赛业生物整理的常见血清型的组织靶向性总结，供大家参考。

特异性启动子能使目的基因在特定的组织和细胞类型中表达，因此我们可以选用特异性启动子，进一步提高目的基因递送的特异性。可以选用一些被改造的特异性启动子，如融合了增强子序列的特异性启动子，这些特异性启动子往往在保证组织特异性的同时也具备较高的启动活性。同时尽量选用较短长度的启动子，以此扩大目的基因的装载容量。下表是由赛业生物整理的常见特异性启动子及其靶向性总结，供大家参考。

二、专业的实验操作对注射效果有重要影响

选择合适和血清型和设计合适的载体只是实验成功的基本前提，而注射方式、注射剂量和实验操作等，这些因素也对我们实验的成败有着重要的影响。

在注射方式上，分为系统性注射和局部注射。系统性注射又包括尾静脉注射、腹腔静脉注射、眼眶静脉注射和颈静脉等。局部注射方式常见的包括脑立体定位注射、肌肉定点注射、心肌原位注射、玻璃体腔内注射、关节腔注射等。系统性注射操作简单，但由于需要依赖病毒在体内随机扩散到达靶组织，因此其病毒用量较大。局部注射所需的病毒量较少，一般100ul以内，但对滴度要求较高。由于是直接将rAAV注射到目标组织中，因而局部注射会有更好的靶向性。我们可以根据实际的需求来选择合适的注射方式，下表是赛业生物整理的针对常见注射部位的有效注射方法，供大家参考。

在实际操作过程中，我们需要详细了解操作步骤和注意细节。特别是一些具有难度的局部注射的方法，这些方法往往涉及开腹、寻找微组织等操作，对实验条件和操作手法要求较高，稍有失误，小鼠便会有较大的损伤，最终影响实验结果。下面给大家介绍几个注射方式的难点及注意细节。

图1. 乳鼠颞静脉注射

图2. 脑立体定位注射

尾静脉注射失败易导致病毒在尾部残留，影响整体病毒注射量和成像结果（如图3第4只小鼠）。

图3. 尾静脉注射

三、结语

一次成功的rAAV体内的基因操作实验，需要考虑多方面的因素。前期需要查阅大量的资料选择血清型和启动子，设计合理科学的方案，并生产出高滴度高感染效率的rAAV。此外拥有熟练的实验操作技能和专业素养，才能有效地将rAAV递送至体内，从而有效实现目的片段的表达。

赛业生物基因治疗一站式解决方案

赛业生物作为一家综合解决方案提供商，建立了多位一体的基因治疗创新性CRO平台服务网络。在过去十余年，赛业生物积累了大量的基因信息数据，在模式动物持续的深耕也让我们在基因编辑技术方面一直走在行业前沿，结合赛业生物在人工智能领域的深度探索，我们可提供高效的基因功能解析与基因治疗一站式解决方案。可为从事基因治疗的研究者提供更高效的基因功能解析与基因治疗一站式解决方案，包括靶点筛选与功能研究，动物模型构建和病毒载体如AAV、LV、ADV等设计与包装，以及表型分析等全流程服务。

结合赛业生物AI领域的优势，通过罕见病数据中心（RDDC），我们能够查询针对眼科罕见病的流行病学数据、药物的发展概况、眼科疾病相关基因数据、眼科基因突变位点及大小鼠模型等数据，还能借助AI进行眼科疾病致病性预测。如有需要，欢迎后台留言或者联系我们咨询~

热门活动推荐