CRISPR/Cas介导的基因编辑系统，可有效治疗X-连锁视网膜色素变性

❖构建RPGR-KO小鼠模型，发现光感受细胞退化与光感受蛋白表达异常。

❖采用CRISPR/Cas介导的基因编辑治疗方案，能有效治疗光感受细胞退化等症状。

作者设计了两个靶向RPGR基因外显子8的sgRNA（图1A）。然后将体外转录的Cas的mRNA和sgRNA注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中构建RPGR-KO小鼠模型。并且通过Sanger测序分析，确定该模型构建成功（图1B）。

作者选择在外显子8（图1C）中具有5bp缺失（c.974_978delAAATT；p.K325Nfs*1）的小鼠进行下一项研究。在WT小鼠上分析RPGR的表达和定位，其显示出杆状免疫反应性，在连接纤毛处具有更亮的小斑点。而在RPGR-KO视网膜中未检测到RPGR染色（图1D）。因此5-bp缺失导致RPGR失活。

作者接着对5bp缺失小鼠模型进行了仔细的表型分析。通过对WT和RPGR-KO小鼠进行视网膜眼底成像（图2A），发现RPGR-KO小鼠在3个月大时视网膜眼底的所有象限都出现了多个均匀分布的小黄白色斑点。并且伴随感光器退化，这些斑点变得更大和汇合。到12个月大时，这些斑点变得稀疏，但色素沉积明显。

经过组织学评估WT和RPGR-KO小鼠的视网膜切片，在6个月大时，外核层（outer nuclear layer, ONL）中的感光细胞有轻微的衰老相关损失。到12个月大时，RPGR-KO小鼠的感光细胞损失变得明显（图2B）。

作者测量ONL厚度，发现WT和突变小鼠之间的ONL厚度存在显着差异（图2C）。伴随形态学变性，视网膜电图（Electroretinogram, ERG）测量的视网膜功能也表现出异常。

通过ERG发现在3个月时，RPGR-KO小鼠中暗适应的ERG与WT小鼠没有显着差异，但b波振幅降低（图2D）。而在6个月时，ERG幅度（包括a波和b波幅度）进一步降低，在12个月大时几乎没有可记录的ERG a波和b波反应（图2E）。

通过两个单独的AAV2/8载体将靶向突变RPGR基因座的sgRNA表达盒和修复供体模板传递给6个月大的RPGR^-/yCas^+/WT小鼠（图4A-D）。

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