我们通常用FedEx在常温下运送胚胎。只要3个工作日就可以从我们公司到达世界任何一个地方。到目前为止，不论是客户让我们进行LacZ染色还是他们接 收到我们固定好的胚胎后自己进行染色，这些程序的进展都相当顺利。我们遵照运送生物材料的标准流程，所以在正常情况下不会出现报关延迟。

不需要。DNA在室温下运送就足够了，以我们的经验来看，在常温下几天的运输对DNA的质量影响不大。而且我们会在注射前检测DNA，如果有任何质量问题我们将会通知您。

在常温下运输固定的胚胎是完全可行的。我们通常采用常规包裹发送固定的胚胎给我们的客户。

我们使用的是FVB/N品系（来源于Charles River实验室），为近交系，这意味着这一品系的所有小鼠具有相同的遗传背景。超排卵的雌鼠产生大量的具有大原核的卵子，使得他们在转基因小鼠制备方面比绝大部分近交系的小鼠有更高的效率。 其它品系例如B6D2F1和C57BL/6J也可以作为卵子供者，但是需要更高的费用。

目的基因随机整合到基因组，因此首代转基因小鼠将会有不同的整合位点。整合基因的拷贝数可能在不同的首代转基因小鼠中也不同。由于这些原因，每一个首代转基因小鼠需要作为一个独立的谱系对待并且与其它首代转基因小鼠分开来进行繁殖。 每个首代转基因小鼠的子代都需要进行转基因遗传和表达的检测。由于不同的整合位点和拷贝数，每一个首代转基因小鼠可以有不同的表达水平。我们不能担保转基因的任何表达。 任何获得的首代小鼠的转基因可能不遵照孟德尔遗传方式。如果整合发生在第一个细胞分裂以后，首代小鼠的转基因可能是嵌合的。嵌合可以导致在第一代子代中遗传频率低于50%。在有些首代小鼠中，转基因可能整合到多个位点上，导致超过50%的遗传频率。在这种情况下，第一代子代的表达水平不同，依赖于他们遗传 了哪个整合位点。这可能是由减数分裂重组如染色体双交换的结果。 如果卵子供者为近交系（例如，FVB/N），首代小鼠应该与背景相同的小鼠进行繁殖以保持纯系的特性。对于来自杂合的B6D2F1品种的首代小鼠，客户必须决定是与一个纯系进行回交还是维持混合背景。 在一条染色体上具有转基因的小鼠叫做杂合子，因为它们在另一条染色体上没有对应的等位基因。产生纯合子转基因小鼠也是有可能的，并且它们与相应的杂合子小鼠相比可能具有更高的表达水平，但是将纯合子和杂合子区分开来比较困难。必须运用一些定量基因分型试验（例如定量PCR或Sonthern杂交）。或者可 将疑似纯合子的小鼠与野生型小鼠杂交并检测所有的子代来看它们是否为杂合子。

胚胎干细胞显微注射是制作基因敲除小鼠的一个最常用的方法。主要过程是将携带目的基因的胚胎干细胞注射到小鼠的囊胚腔中获得嵌合体小鼠。所得嵌合体小鼠的组织，将同时含有来源于囊胚的细胞和胚胎干细胞。嵌合体小鼠必须和野生型小鼠配种以决定遗传改变的生殖系能否传递，这样可能获得转基因或打靶基因（来源于 胚胎干细胞）稳定的生殖系传递的小鼠。一般情况下，大约能获得50%继承了目的基因的后代。（看下文，有更多关于嵌合体小鼠生殖系传递的内容） 用胚胎干细胞注射与DNA显微注射类似，首先要对囊胚的供体鼠进行超排和交配以获得大量的胚胎，然后将注射了胚胎干细胞的囊胚移植到代孕母鼠输卵管（或子宫）使胚胎继续发育。 注射用的胚胎干细胞可以由客户在注射当天早上（9:00前）提供新鲜制备的胚胎干细胞，也可以提供冻存的细胞由Cyagen公司进行扩增(最晚在注射前2天提供）。

ES细胞可以由客户直接提供或者送至本公司进行扩增。通常在注射前几天开始复苏细胞并在注射当天早晨收集新鲜细胞送到我们公司。客户必须提供在送细胞的同时提供相应的证明，证实细胞没有任何鼠源的病原体。如果客户提供的是冻存的细胞，则需要通过包含支原体在内的病原体的测试，同时承担这些测试费用。 如果客户在注射当天提供细胞，我们需要客户提供相当于覆盖一个35 mm培养皿的细胞量。如果是生长在Feeder的细胞，则ES细胞必须提前一个小时种到明胶板上（培养条件与一般的ES培养相同）。随后将细胞重悬、离心，去除细胞碎片并用0.3 ml的ES细胞培养液重悬富集ES。细胞悬液必须放在冰上运至本公司。 我们会对注射用冻存细胞的扩增进行收费，费用取决于扩增克隆的数量以及是否需要Feeder细胞。

干细胞：

• 我们可以提供质检报告，质检报告可以直接用于发文；
• 大量的引用文献；
• 无污染。

完全培养基：

• 血清优势，我们针对市面上的几乎所有的血清进行过筛选，挑选对细胞状态维持最佳的血清大批量采购，保证我们的细胞处于最佳的状态。
• 我们有大量的引用文献。

无蛋白非程序冻存液:

• 无任何蛋白成分，减少细胞污染机会，减少蛋白对细胞生长的影响；
• 无需程序降温；
• 批次之间性能稳定；
• 复苏率高达90%。

小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）：

• 无支原体污染；
• 射线灭活，无残留、灭活彻底对人体无伤害；
• 大量生产批次稳定；
• 价格优惠。

 

（1）神经元：原代冻存；

（2）星型胶质细胞、神经干细胞：第二代冻存；

（3）ICR小鼠成纤维细胞：未灭活的是原代冻存；灭活的是第一代冻存；

（4）骨髓、脂肪间质干细胞：除C57BL/6、Balb/C小鼠是第6代，其他的都是第二代； GFP/RFP标记：除C57BL/6小鼠是第9代，其他的都是第5代；

（5）胚胎干细胞：第10代左右； GFP/RFP标记：传代扩增（第11代左右）；

以上所列代次某些细胞偶尔会有变动，购买之前请询问相关的销售。

（1）干细胞都是1×10⁶个/管；

（2）灭活的小鼠胚胎成纤维细胞也是1×10⁶个/管；未灭活ICR小鼠成纤维细胞的规格是5×10⁶个/管；

（3）神经元和星形胶质细胞等原代细胞有几种规格：1×10⁶个/管、2×10⁶个/管和4×10⁶个/管。