Nppa-Cre小鼠|Nppa-Cre工具鼠|价格-赛业生物

产品编号：C001190

品系背景：C57BL/6N

传代方案：杂合与WT互配

主要表达部位：心肌细胞

品系描述

Nppa基因编码的蛋白质属于利钠肽家族的一员，利钠肽与控制细胞外液量以及电解质的平衡有关。在翻译过程中，该蛋白首先形成了包含一个信号肽的前体，经加工后从N端释放出与血管活性肽、心脏舒张素相似的肽，并且从C端释放出具有利钠剂活性的肽。该基因的突变与家族型6型心房颤动有关。在小鼠出生前，Nppa基因首先在心室中表达，随后转移到心房中表达；在健康的产后雌鼠的心脏中，Nppa的表达作为胎儿基因激活程序的一部分，仅限于心房中；而在小鼠成年后，Nppa可在响应病理应激的心室中重新表达。由于其独特的表达模式，Nppa基因可作为研究心脏腔形成和心脏规格的重要标记，还可用于研究心肌肥厚和心力衰竭的分子机制^[1]。

Nppa-Cre小鼠利用基因编辑技术构建，将Cre重组酶基因表达元件敲入小鼠内源Nppa基因的编码起始位置，并替换了1号外显子的部份编码序列以模拟小鼠内源基因的表达模式，同时小鼠内源基因的表达被破坏。Nppa-Cre小鼠可使Cre重组酶在心室和心房心肌中特异性表达。当该品系小鼠与含有loxP位点的小鼠杂交后，子代可在心肌细胞中产生由Cre重组酶介导的loxP位点间的序列重组。该品系杂合小鼠可育，生长正常。

构建方式

将Cre重组酶基因表达元件敲入小鼠内源Nppa基因的编码起始位置，并替换了1号外显子的部分编码序列以模拟小鼠内源基因的表达模式，同时小鼠内源基因的表达被破坏。

验证数据

检测方法

将Nppa-Cre小鼠与Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，产生双基因杂合子代小鼠，Cre酶介导的重组将导致tdTomato蛋白在子代Cre阳性细胞中表达。采集6周龄子代小鼠的心脏、脑部、睾丸、子宫、大肠、脾脏和肺部等组织，通过免疫组化检测和免疫荧光染色分别观察不同组织中tdTomato蛋白的表达情况以确定Cre重组酶的活性。

基因型

实验组（Cre+）：Nppa-Cre[KI/+]; Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]

对照组（Cre-）：Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/CKI]

检测结果

心脏组织的免疫组化检测

图1. 心脏组织的免疫组化检测。取6周龄子代小鼠的心脏组织，通过免疫组化观察重组情况。结果显示，与对照组Cre-小鼠相比，Cre+小鼠的心肌细胞中存在明显的tdTomato信号，说明Cre+小鼠在心肌细胞中发生了重组。（Cre+：Nppa-Cre[KI/+]; Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]；Cre-：Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/CKI]，下同。）

Cre重组酶在心脏组织中的表达情况

图2. 子代小鼠心脏组织的免疫荧光检测。Cre+小鼠在心房、心室内的心肌细胞和血管内皮细胞中存在明显的tdTomato蛋白红色荧光，表明在此类细胞中存在Cre重组酶的表达。而对照组Cre-小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达。

Cre重组酶在大肠、肺部、脑部和脾脏中的表达情况

图3. 大肠、肺部、脑部和脾脏的免疫荧光检测。Cre+小鼠在大肠组织中几乎无法观察到tdTomato蛋白红色荧光；在肺部平滑肌中观察到tdTomato蛋白红色荧光；在脑组织（主要分布于海马、皮层）中观察到tdTomato蛋白红色荧光；在脾脏中观察到少量的tdTomato蛋白红色荧光。综上，说明Cre+小鼠在大肠中几乎不存在Cre重组酶的表达，而在肺部、脑部和脾脏的部分细胞中存在Cre重组酶的表达。而对照组Cre-小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达。

Cre重组酶在子宫和睾丸中的表达情况

图4. 子代小鼠子宫和睾丸的免疫荧光检测。Cre+小鼠在子宫中存在少量的tdTomato蛋白红色荧光，此类细胞类型未知；在部分精子发生区域中存在tdTomato蛋白红色荧光，并且在睾丸间质、次级精母细胞中观察到少量的荧光出现，说明在睾丸间质、次级精母细胞中发生了部分重组。综上，说明Cre+小鼠在子宫和睾丸的部分细胞中存在Cre重组酶的表达。而对照组Cre-小鼠中检测不到tdTomato红色荧光的表达。

总结

Nppa-Cre小鼠模型中Cre重组酶的表达主要定位于心房、心室内的心肌细胞和血管内皮细胞，同时可在肺部、脑部、脾脏、子宫和睾丸的部分细胞中发生Cre重组酶介导的重组，而在大肠组织中几乎不存在Cre重组酶的表达。综上所述，该模型基本构建成功。该品系使用雄鼠进行配繁可能存在生殖泄露。

注意事项

该品系Cre重组酶基因表达元件的插入位点位于4号染色体上，请避免使用与Cre工具鼠同条染色体上打靶的基因编辑小鼠进行配繁。

参考文献

Irina A. Sergeeva, Ingeborg B. Hooijkaas, Ingeborg Van Der Made, Willeke M.C. Jong, Esther E. Creemers, Vincent M. Christoffels, A transgenic mouse model for the simultaneous monitoring of ANF and BNP gene activity during heart development and disease, Cardiovascular Research, Volume 101, Issue 1, 1 January 2014, Pages 78–86.