产品编号:C001326
品系全称:BALB/cAnCya-Cd3tm1(hCD3)/Cya
品系背景:BALB/cAnCya
传代建议:纯合与纯合互配
品系描述
分化簇3(CD3)是一种蛋白质复合物,它是T细胞的共同受体,参与细胞毒性T细胞(CTL)和辅助型T细胞(TH)的激活。CD3由五种肽链组成,即γ链、δ链、ε链、ζ链和η链,这些链都是跨膜蛋白。CD3分子的跨膜区通过盐桥与TCR的两条肽链的跨膜区连接,形成TCR-CD3复合体,共同参与T细胞对抗原的识别 [1-2]。TCR识别抗原后,活化信号由CD3转导至T细胞内。在T细胞的所有发育阶段,CD3都具有高度特异性,因此被视为T细胞特异性的免疫组织化学标记物。此外,CD3存在于几乎所有的T细胞淋巴瘤和白血病中,可用于区分表面相似的B细胞和骨髓肿瘤。由于CD3在T细胞激活和抗原识别中起着重要作用,它正在成为Ⅰ型糖尿病和其他自身免疫性疾病免疫抑制疗法中的重要药物靶点 [3]。
本品系是通过胚胎干细胞(ES)靶向技术,将小鼠的CD3编码基因原位替换为人的CD3基因,从而获得的CD3人源化模型。本模型可用于研究T细胞的激活和抗原识别机制,以及在自身免疫性疾病的免疫抑制疗法中,用于CD3靶向药物的开发、验证和评价。
构建方式
通过胚胎干细胞(ES)靶向技术将小鼠CD3复合物的三个成分,即Cd3ε、Cd3δ和Cd3γ,替换为对应的人类同源基因CD3E、CD3D和CD3G。
研究应用
验证数据
图1. 人源CD3(hCD3)和小鼠CD3(mCD3)的表达的流式细胞术检测。纯合BALB/c-hCD3小鼠外周血、胸腺和脾脏中均可检测到人源CD3E+细胞,且几乎不存在鼠源CD3E表达,而在野生型小鼠(WT)中只有鼠源CD3E表达。
图2. T细胞及亚群(CD4+和CD8+)的比例检测。纯合BALB/c-hCD3小鼠外周血、胸腺和脾脏中CD3+ T细胞及其亚群CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例与野生型小鼠(WT)中的比例基本一致。
图3. 野生型小鼠来源的PBMC(BALB/c)、BALB/c-hCD3小鼠来源的PBMC(BALB/c-hCD3)和人PBMC(hPBMC)的体外杀伤效果对比。采集小鼠外周血单个核细胞(PBMC),将人PBMC、BALB/c及BALB/c-hCD3小鼠来源的PBMC分别与人多发性骨髓瘤细胞(MM1R)进行体外孵育,48h后检测对肿瘤细胞的杀伤效果。结果显示BALB/c-hCD3小鼠来源的PBMC在体外对人源肿瘤细胞的杀伤效果与人PBMC相当,而野生型小鼠来源的PBMC对人源肿瘤的杀伤效果较弱。此外,内部检测数据显示,与市场同类模型相比,此BALB/c-hCD3小鼠的PBMC具有更好的杀伤效果(数据未展示)。
效应细胞(E):PBMC;靶细胞(T):MM1R;E:T=1 : 1=2*104 : 2*104;时间:48h;抗体:1nM BiTE。
表型总结
BALB/c-hCD3小鼠成功表达人源CD3,且BALB/c-hCD3纯合小鼠不表达鼠源CD3,只表达人源CD3。BALB/c-hCD3纯合小鼠体内T细胞及其亚群CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例与野生型基本一致,表明人源CD3的表达不会影响小鼠体内T细胞的组成。此外,PBMC杀伤实验结果显示,BALB/c-hCD3小鼠的PMBC具有和人PBMC相似的体外肿瘤体外杀伤效果,表明其具有和人类PBMC相似的功能。
参考文献
[1]Dong D, Zheng L, Lin J, Zhang B, Zhu Y, Li N, Xie S, Wang Y, Gao N, Huang Z. Structural basis of assembly of the human T cell receptor-CD3 complex. Nature. 2019 Sep;573(7775):546-552.
[2]Dykhuizen M, Ceman J, Mitchen J, Zayas M, MacDougall A, Helgeland J, Rakasz E, Pauza CD. Importance of the CD3 marker for evaluating changes in rhesus macaque CD4/CD8 T-cell ratios. Cytometry. 2000 May 1;40(1):69-75.
[3]Bolt S, Routledge E, Lloyd I, Chatenoud L, Pope H, Gorman SD, Clark M, Waldmann H. The generation of a humanized, non-mitogenic CD3 monoclonal antibody which retains in vitro immunosuppressive properties. Eur J Immunol. 1993 Feb;23(2):403-11.