F8 KO小鼠|F8基因敲除小鼠|血友病A小鼠模型-赛业（苏州）生物科技有限公司

产品编号：C001211

传代建议：纯合与纯合互配

品系描述

F8基因编码的凝血因子Ⅷ（FⅧ）是一种参与血液凝固的内源途径的大型血浆糖蛋白。该基因产生两种选择性剪接的转录本，其中较大的糖蛋白，即异构体a，以非共价复合物的形式与von Willebrand因子（vWF）在血浆中循环。FⅧ作为因子Ⅸa的辅助因子，在钙和磷脂存在的情况下，将因子Ⅹ转化为活化形式Ⅹa。F8基因缺陷会导致血友病A（HA），这是一种常见的隐性X连锁凝血障碍，以及由于FⅧ缺陷引起的血栓形成症。

本品系是通过基因编辑技术在小鼠F8基因中引入新霉素抗性基因（Neo）表达元件，从而阻断该基因的正常表达所构建的。纯合F8 KO小鼠可育，毛色为棕色，生长正常。纯合雌性和半合雄性小鼠的凝血因子Ⅷ活性与野生型小鼠相比显著降低，并且凝血时间延长，表现为典型的血友病A（HA）样表型。需要注意的是，对F8 KO小鼠进行剪尾操作时，必须立即烧灼鼠尾，否则小鼠可能会在数小时内因大量失血而死亡。因此，建议在小鼠达到4周龄后进行剪尾操作。

构建方式

F8基因位于小鼠的X染色体上，利用ES打靶技术将该基因的部分16号外显子和部分16号内含子区域替换成Neo元件，从而造成F8基因表达产物的缺失。

验证数据

mRNA表达水平检测

图1. 6周龄雄性F8 KO小鼠和野生型小鼠（WT）的F8 mRNA表达检测。RT-qPCR检测结果显示，F8 KO小鼠的肝脏中不存在F8 mRNA的表达。

FVIII活性检测

图2. F8 KO小鼠FVIII活性检测。F8 KO小鼠FⅧ活性为野生型小鼠（WT）的4%，属于中度型血友病A模型。（数据以mean±SD表示，***代表p<0.001）

凝血四项检测

图3. 8周龄F8 KO小鼠和野生型小鼠（WT）凝血四项指标。结果显示，与野生型小鼠相比，F8 KO小鼠活化部分凝血活酶时间（APTT）显著延长，表明小鼠出现凝血功能障碍，出血时间延长，与经典F8 KO疾病模型的表型相似^[1]。此外，F8 KO小鼠凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）和纤维蛋白原（FIB）与野生型小鼠相比无显著差异，符合临床血友病A患者凝血指标的变化特征^[2]。

hFⅧ^BTX1和hFⅧ^BTX2基因递送

图4. hFⅧ^BTX1和hFⅧ^BTX2基因递送*。检测结果显示，18周龄F8 KO小鼠不表达FⅧ且FⅧ活性为2%。在进行基因递送后，FⅧ的表达量及活性均显著升高。

*该数据由客户提供。

参考文献

[1]Bi L, Lawler AM, Antonarakis SE, High KA, Gearhart JD, Kazazian HH Jr. Targeted disruption of the mouse factor Ⅷ gene produces a model of haemophilia A. Nat Genet. 1995 May;10(1):119-21.

[2]DXY临床就医网. (2021). 血友病A患者临床凝血功能检测结果的解读. https://lcjy.dxy.cn/article/485714