Vil1-MerCreMer小鼠|Vil1-MerCreMer工具鼠|价格

产品编号：C001433

品系背景：C57BL/6J

传代建议：纯合与纯合互配

主要表达部位：肠绒毛、隐窝上皮细胞

品系描述

VIL1基因编码的Villin 1蛋白属于钙调控的肌动蛋白结合蛋白家族，是刷状缘细胞骨架的主要部分，在肌动蛋白丝的封顶、切断和捆绑中起作用。Villin 1蛋白是一种上皮细胞特异性的Ca(2+)调控的肌动蛋白修饰蛋白，能够调节微绒毛肌动蛋白丝的重组，在肌动蛋白核化、肌动蛋白丝束组装、肌动蛋白丝封顶和切断中起作用。VIL1主要在胃肠道、胆囊和肾小管等部位的上皮细胞中选择性地表达。

Vil1-MerCreMer小鼠是通过将小鼠Vil1启动子调控的他莫昔芬（Tamoxifen）诱导型Cre重组酶蛋白MerCreMer基因表达元件插入到小鼠H11安全位点中构建的。在未诱导前，MerCreMer仅存在于细胞质中，只有在他莫昔芬处理后，才能进入细胞核发挥重组作用。当该品系小鼠与含有loxP位点的小鼠杂交后，经他莫昔芬诱导后可在子代的小肠及大肠的绒毛和隐窝上皮细胞中发生由Cre重组酶介导的loxP位点间的序列重组。小鼠内源性小鼠Vil1基因表达的起始时间为9.0dpc，本品系中Cre重组酶表达的起始时间约为12.5dpc。

构建方式

利用基因编辑技术将“Vil1 Promoter-MerCreMer”基因表达元件插入小鼠H11安全位点中。

图1. Vil1-MerCreMer小鼠基因编辑打靶示意图

验证数据

检测方法

将Vil1-MerCreMer小鼠与Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，产生双杂合子代小鼠，在子代小鼠发育到6周龄时，连续5天进行Tamoxifen诱导（腹腔注射，75 mg/kg）。Cre重组酶介导LSL元件的删除将导致tdTomato蛋白在子代Cre阳性细胞中的表达，诱导后一周采集小鼠的肠道、胃部、输尿管、肾脏、卵巢、子宫、附睾和睾丸等组织，通过免疫荧光染色检测tdTomato蛋白信号的分布以确定Cre重组酶的表达情况。

实验分组

Cre+Tam+：Vil1-MerCreMer[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]；小鼠经Tamoxifen诱导；

Cre+Tam-：Vil1-MerCreMer[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]，小鼠未经Tamoxifen诱导。

检测结果

Cre重组酶在小肠组织中的表达情况

图2. 十二指肠、空肠和回肠组织免疫荧光染色结果。经他莫西芬诱导的Cre+Tam+小鼠的十二指肠、空肠和回肠等小肠组织隐窝、肠绒毛上皮细胞中均存在大量的tdTomato阳性信号（红色荧光），表明Cre重组酶在小鼠小肠中的强烈表达；而未经他莫西芬诱导组的这些组织中没有tdTomato的表达，不存在Cre重组酶的活性。

Cre重组酶在大肠组织中的表达情况

图3. 盲肠、结肠和直肠组织免疫荧光染色结果。经他莫西芬诱导的Cre+Tam+小鼠的盲肠、结肠和直肠等大肠组织的隐窝、肠绒毛上皮细胞中均存在大量的tdTomato阳性信号，表明Cre重组酶在小鼠大肠中的强烈表达；而未经他莫西芬诱导组的这些组织中没有tdTomato的表达，不存在Cre重组酶的活性。

Cre重组酶在胃部、输尿管和肾脏组织中的表达情况

图4. 胃部、输尿管和肾脏组织免疫荧光染色结果。经他莫西芬诱导的Cre+Tam+小鼠的肾脏和胃部少量的细胞中存在tdTomato阳性信号，表明Cre重组酶在这些部位的少量表达，在输尿管中不存在Cre重组酶的表达；而未经他莫西芬诱导组的这些组织中没有tdTomato的表达，不存在Cre重组酶的活性。

Cre重组酶在雌性生殖腺中的表达情况

图5. 子宫和卵巢组织免疫荧光染色结果。经他莫西芬诱导的Cre+Tam+小鼠的子宫和卵巢中不存在tdTomato阳性信号，表明在这些部位不存在Cre重组酶的活性，不会造成基因的生殖系删除。

Cre重组酶在雄性生殖腺中的表达情况

图6. 睾丸和附睾组织免疫荧光染色结果。经他莫西芬诱导的Cre+Tam+小鼠的睾丸和附睾中仅存在极微量的tdTomato阳性信号，表明在这些部位Cre重组酶表达泄漏发生的概率极低，不会造成基因的生殖系删除。

总结

Vil1-MerCreMer小鼠模型中Cre重组酶的表达主要定位于大肠和小肠的隐窝及肠绒毛上皮细胞中，仅在肾脏和胃部的某些细胞中检测到少量的Cre重组酶的活性，在输尿管中没有Cre重组酶的表达。此外，在生殖腺中几乎不存在Cre重组酶的活性，表明该模型发生生殖泄露可能性较低。综上所述，该模型是一个肠道隐窝和肠绒毛上皮细胞特异性的Cre工具鼠。

注意事项

该品系Cre重组酶基因表达元件插入位点位于11号染色体上，请避免使用与Cre工具鼠同条染色体上打靶的基因编辑小鼠进行配繁。