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C-NKG

产品编号:C001316

品系名称:NOD-Prkdcscid Il2rgem1/Cyagen

基因型:纯合子

背景:NOD-Scid

 

简介

C-NKG小鼠是赛业生物在NOD-Scid背景品系上敲除Il2rg基因自主研发的一种重度免疫缺陷小鼠。C-NKG小鼠缺乏成熟的T、B、NK免疫细胞,补体活性降低,巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱,可高效地移植人造血干细胞(HSC)、外周血单核细胞(PBMC),患者来源的异种移植物(PDX)或成体干细胞和组织,是目前公认的免疫缺陷程度高且可用于肿瘤、免疫、自身免疫性疾病、免疫治疗疫苗、GvHD/移植、安全性评估等研究的优秀模型。

 

品系特点

  • 缺乏成熟的T、B和NK细胞。
  • 补体活性降低。
  • 巨噬细胞和树突状细胞功能异常。
  • 随着年龄的增长,T和B细胞泄漏的发生率极低。
  • 淋巴瘤的发生率极低(与NOD-Scid模型不同),可用于长期和短期实验。
  • 不发展糖尿病。

 

研究应用

  • 与NOD-Scid小鼠相比,C-NKG小鼠的人体细胞和组织移植存活率显著提高,同时能够植入更高比例的正常或癌变人类细胞和组织。
  • 可高效地移植人造血干细胞(HSC)、外周血单核细胞(PBMC),患者来源的异种移植物(PDX)或成体干细胞和组织。
  • 可用于肿瘤、免疫、自身免疫性疾病、免疫治疗疫苗、GvHD /移植、安全性评估等研究。

 

模型验证

图1. Prkdcscid突变是由Prkdc基因84号外显子中的TAT→TAA产生的,

基因测序结果表明,C-NKG小鼠携带有Prkdcscid突变。

 

图2. 对C-NKG小鼠Il2rg基因进行PCR检测,结果表明C-NKG小鼠Il2rg基因成功敲除。

野生型条带大小:388bp;敲除部分片段条带大小:1430bp。

 

图3. C-NKG小鼠外周血中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。

取BALB/c、C-NKG小鼠的外周血,对其T、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠外周血中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)、辅助性T细胞(CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD335+CD3-)几乎完全缺失。

 

     

图4. C-NKG小鼠脾脏组织中的B、T、NK细胞严重缺失,为重度免疫缺陷鼠。

取BALB/c、C-NKG小鼠的脾脏组织,对其T、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。结果表明,与BALB/c小鼠相比,C-NKG小鼠脾脏组织中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)、辅助性T细胞(CD3+CD4+CD8-)、细胞毒性T细胞(CD3+CD4-CD8+)、NK细胞(CD335+CD3-)几乎完全缺失。

 

图5. huPBMC-C-NKG小鼠生存曲线。

huPBMC-C-NKG小鼠随着移植物抗宿主病(GvHD)的出现而逐渐发生死亡。

 

图6. 人源PBMC移植C-NKG小鼠后外周血中人源CD45+细胞的含量变化。

PBMC移植后C-NKG小鼠外周血中人源白细胞的含量逐渐增加,3w后CD45+的平均比例在50%左右。

 

图7. 人源PBMC移植C-NKG小鼠后外周血中人源CD3+细胞的含量变化。

huPBMC-C-NKG小鼠重建以T细胞为主。

 

图8. 人肝癌细胞Huh7皮下异种移植肿瘤生长曲线

 

图9. 人胃癌细胞HGC-27皮下异种移植肿瘤生长曲线

 

图10. 人结肠腺癌细胞SW620皮下异种移植肿瘤生长曲线

将细胞以皮下注射的形式接种到C-NKG、NOD/Scid小鼠体内,并在不同的时间点测量成瘤体积。细胞接种量为5x106/只,数据以Mean±SEM形式呈现。结果显示,人肝癌细胞Huh7、人胃癌细胞HGC-27和人结肠腺癌细胞SW620在C-NKG小鼠上均能有效地建立肿瘤模型。

 

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